TY - JOUR A2 - Murakami, AU - Sumida Hiroshi, AU - Takeshi - Yanagawa, AU - Doi Hiroshi, Nobuhide PY - 2012 DA - 2012/09/23 TI -在体外通过mRNA显示和基因连接乳化液PCR选择Fab片段SP - 371379 VL - 2012 AB - 在体外显示筛选方法已成为重组抗体工程的有效工具。基于无细胞翻译系统的mRNA显示与基于细胞的显示方法(如噬菌体显示)相比，具有库容量大、选择过程快等优点。然而，由于其将新生多肽与其编码的mRNA连接在核糖体上的特点，信使rna显示被局限于选择单链多肽，如scFvs。本研究提出了一种利用mRNA显示结合乳化液PCR技术筛选异质二聚体Fab片段的新方法。我们设计了一对互补的5 ' UTR序列，通过重叠扩展PCR将Fab重链和轻链基因连接在油包水乳剂中。我们证实了模型Fab片段的重链和轻链的两个mrna显示多肽关联到活性形式，并且在模型亲和选择之后的基因链接乳液PCR中，每轮都有一个特定Fab片段的基因被富集超过100倍。我们进一步从随机化Fab片段库中定向进化具有较高结合活性的Fab片段。《核酸杂志》(JF - Journal of核酸