抗菌特性芦荟intracanal药物反对粪肠球菌生物膜在不同的发展阶段

抽象的

背景．摘要中药复方作为根管药物在牙髓学领域的应用已成为值得关注的问题芦荟化合物，其抗菌作用已被证明在浮游形式粪肠球菌．本研究的目的是评估抗菌效果芦荟在E. FAECALIS.生物膜在4^TH.6.^TH.发展周。材料和方法．使用130个单根管齿，没有异常和龋齿。它们分为两组65颗牙齿，为生物膜生产的四个和六周。检查每组的五个样品用于确认电子显微镜下的生物膜形成。研究了研究组，用抗微生物剂作为一种脑内药物，包括用20个样品处理芦荟研究了氢氧化钙和磷酸盐缓冲的盐水，以及生物膜和病原体的存活。牙本质芯片悬浮液用于菌落形成单位（CFU）计数估计剩余E. FAECALIS.计数。结果．cfu意味着4^TH.周亚群芦荟，磷酸盐缓冲盐水和氢氧化钙为0,69166.66±31688.58，以及25000±30822.07，在6中^TH.周，它分别为136.36±323.33,95000±12247.44和27501.66±36570.34，在二手材料之间显示出显着差异（ ）。结论．芦荟与氢氧化钙相比，消除了4^TH.6.^TH.周生物膜并显示出显着的抗菌性能E. FAECALIS.生物膜。这些结果支持的效力芦荟用作胞内药物中的天然抗微生物材料。

1.介绍

尽管应用了各种运河清洁技术和工具，以及洗涤溶液和抗微生物药物，耐药性微生物如粪肠球菌对根管治疗成功仍然是一个挑战[1- - - - - -3.］．这种细菌是复发性感染和抗性流动感染的致病性中最常见的微生物，其在22-77％的失败病例中发现[4，5］．它是一种革兰氏阳性的兼性厌氧细菌，其具有高抗高pH和盐水溶液的浓度，并且具有生物膜形成的高能力，是最重要的毒力因子之一[2，6］．

生物膜是生物体的动态和复杂的结构，导致对环境应力的抗性，如抗微生物，并且比浮游细菌更困难，以消除[7］．因为生物膜使细菌抗吞噬作用，抗体和抗微生物剂，随着时间的推移以及将导致生物膜成熟的矿化的出现，问题将变得更加明显[8，9］．

使用管内药物是消除或减少微生物种群的方法之一。氢氧化钙是最常见的根管药物，尽管具有适当的抗菌谱，但对根管的作用不大E. FAECALIS.［9- - - - - -11.］．

由于合成药物的副作用，最近考虑了使用草药的趋势[12.］．芦荟是一种抗菌，抗病毒，抗真菌和抗炎草本化合物，用于牙膏和漱口水。它还被研究为运河洗涤剂[13.- - - - - -16.］．这种草药化合物对许多口服病原体具有抑制作用，包括E. FAECALIS.，酿脓链球菌,和念珠菌白葡萄酒，是由于蒽醌酚类化合物[13.，17.］．

芦荟是凝胶，可用作肠内药物。芦荟是生物相容性的，在根系周围的组织附近没有毒性问题[16.，18.］．琼脂扩散，肉汤扩散和直接接触方法是评估这些组分的抗菌性的最常规方法[13.，15.，17.，19.］．本研究的目的是评估抗菌性质芦荟凝胶作为一种胃癌药物E. FAECALIS.生物膜在4^TH.6.^TH.周发展通过菌落形成单位(CFU)计数法看是否芦荟凝胶具有与其他常规抗微生物剂的相同活性。

2。材料和方法

2.1。样品的制备

本研究由当地伦理委员会批准，参考号IR.TBZMED.VCR.REC.1398.401。在本研究中，使用了130个没有异常和龋齿的单根管齿。通过超声波方法除去所有样品的牙周组织和斑块，并将样品保持在0.5％的氯胺T溶液中直至研究完成。通过金刚石圆盘通过金刚石圆盘切断牙齿的冠冠，水冷却至标准长度为12mm。

通过文件K编号15 (Mani Co.， Japan)确定功能的长度后，使用ProTaper旋转系统对运河进行清洗和整形[20.]而且用于准备的文件是F5准备运河。在下一步中，在次氯酸钠（牙科天空批发商有限公司，英格兰）程序期间使用2.5％洗涤溶液，其由10毫升注射器用30号针进行。为了除去涂片层，1毫升次氯酸盐溶液，25.5％，1分钟，然后使用1毫升17％的EDTA溶液1分钟，并最终溶液是甘盐的。随机选择五个样品，确保牙本质壁的清洁和缺乏细菌，并在电子显微镜下研究了牙本质小管的开放性。根据在运河中形成的生物膜年龄的研究样品被分组如下：A组：四周生物膜（20个样品）;B组：六周生物膜（20个样品）。

在制备运河后，将样品在121℃和15psi压力下高压灭菌20分钟，以杀死所有现有的微生物。为了检查所提提及的方法的效率，将所有样品在脑心脏输注肉汤（BHIB）（BHIB）（BHIB）（Merck，Germany）中孵育24小时，在37℃下孵育24小时。为了形成E. FAECALIS.ATCC®29212™生物膜，纯细菌培养物在37℃下在10％CO培养₂24小时的压力，含有10个细菌细胞的溶液⁸ cells/ml, which was equivalent to an optical density of 0.1 by using the UV spectrophotometer, was prepared [21.，22.］．将牙齿置于无菌1.5ml Eppendorf小瓶中，含有无菌的1ml培养基，并向每个小瓶中加入0.1ml上述溶液（微生物溶液）。每天，将1毫升新的培养基（没有细菌）加入小瓶中。在第一组中，该过程进行了4周和第二组进行了6周。

在提到的时间段之后，将来自每组的5个样品随机选择并在电子显微镜下检查，以确保形成生物膜（图1）。

根据所用的抗微生物剂，每组分为3个子组，如下：子组1（20个样本芦荟）：1毫升芦荟凝胶(100%芦荟凝胶，Sillaneh Co.，Iran）注入了每个运河亚组2（20个样品）：使用凌索螺旋将氢氧化钙置于运河中亚组3（PBS）（20个样品）：该亚组是对照组，并且运河仅用2毫米这种物质洗涤

在37次孵育1周后^ºC在正常湿度的培养箱中，用10ml蒸馏水将抗菌药物从管中冲洗出来，然后用纸尖烘干。收集牙残，使用4-5 Gates gliden钻头和II类生物罩，然后传送到含有1 ml无菌TSB培养基的微离心机，在37°C的微嗜氧条件下培养24小时。在完成微通气条件下的培养周期后，在培养24小时后，用3倍稀释的生理血清(10μ.L细菌培养基和90 μ.L的新鲜培养基）然后在特定的板上培养（Mueller-hinton琼脂，默克，德国）。细菌的数量由菌落计数机确定。

2.2。统计分析

报告了使用描述性统计（平均值±标准偏差）的研究结果。Kruskal-Wallis测试用于比较三组的CFU水平：芦荟，磷酸盐缓冲的盐水（PBS）和4个氢氧化钙^TH.6.^TH.周间隔，由于数据不寻常分配数据。CFU与4的比较^TH.6.^TH.考虑到数据异常分布，在每组分别分别进行数周，由Mann-Whitney进行U测试。通过Kolmogorov-Smirnov测试分析了数据的正常性。使用SPSS17软件进行统计分析，以及 被认为是重要的。

3.结果

描述性统计结果显示在表中1．表中呈现的结果1与自己相比，每组的4和6周级别之间没有显示统计学上有显着差异（价值> 0.05）。

kruskal-wallis与细菌中CFU的平均值之间的比较代表了这三组与4群中的三组存在显着差异^TH.周和6^TH.暴露抗菌剂和生物膜后的一周（值< 0.001)(表1）。

4。讨论

本研究的目的是探讨抗菌作用芦荟4^TH.6.^TH.周的E. FAECALIS.生物膜并将其与氢氧化钙进行比较。该研究的结果显示出显着的积极效果芦荟关于消除生物膜发育阶段的生物膜;相比之下，氢氧化钙代表了非常弱的抗菌作用。它与我们的零假设一致，芦荟对微生物定植有可接受的疗效。E. FAECALIS.是与口腔的多种细胞环境中的颅内感染有关的主要药剂之一。

为了成功地治疗根，从管道中除去微生物是必不可少的。微生物以两种形式的生物膜和管内氏菌族存在，并且消除生物膜比浮游态更困难[23.，24.］．

E. FAECALIS.是治疗失败和耐药感染病例中最常见的微生物[25.，26.］．这种细菌具有高潜力，可侵入牙本质小管并形成生物膜，因此它是耐用管中仪器产生的条件的抵抗力，使用清洁剂，以及使用胆晶药物，例如氢氧化钙[27.］．在这项研究中，E. FAECALIS.使用细菌的抗性感染患病率高，并且难以消除。

与大多数抗微生物研究不同，我们使用生物膜而不是浮游形式，这比浮鳞状态抗性1000倍。生物膜是多糖基质中埋藏细菌的动态结构[28.］．根据Kishen等人。的[23.4)研究中,^TH.孵育后的一周，细菌覆盖牙本质的所有表面，并在6之后^TH.周，他们随着矿化的出现而变得成熟[23.，29.，30.］．随着生物膜的年龄增加，由于钙化和组织，其阻力增加。本研究的选定时期为4^TH.6.^TH.周[8］．

为了重建临床情况，我们使用拔牙，在牙齿内培养生物膜，在根管内暴露抗菌药物，牙本质堵塞对材料的抗菌能力的影响。

本研究中使用的抗微生物剂是氢氧化钙和芦荟．氢氧化钙是骨质药物的金标题[31.］．这些材料会损害细菌的细胞壁或引起蛋白质和DNA的变性，导致细菌死亡[32.，33.］．

E. FAECALIS.对大多数抗微生物剂如氢氧化钙（细菌渗透泵活性）相对抗性相对抵抗34.］．在本研究中，结果也与其他研究氢氧化钙的残疾的结果一致。然而，如本研究所述，已经使用了生物膜代替浮鳞状态，从而增加了该研究的价值。抗微生物活性的调查方法是CFU计数。在以前的研究中，使用的方法主要是琼脂扩散，其比CFU更低的准确性[35.，36.］．

最近，已经注意到在牙髓虫中使用草药，因为合成药物具有Paregoric的毒性增加了细菌抗性。相反，草药是便宜的，可用的，毒性较小，具有治疗性质，并且受到患者的很好的接受[34.，37.］．

本研究中使用的草药为芦荟，这是与抗炎，抗菌，抗真菌，伤口愈合和疼痛缓解性能的草药组合，并用于各种牙科区域[17.，37.］．在本研究中，其抗菌性能优于氢氧化钙。芦荟与氢氧化钙作为抗氧化剂相比具有强烈的抗菌效果，并减少自由基产生。相反，其细胞毒性低于氢氧化钙[11.，15.，17.，34.，38.］．这种草药可以在野外和广泛的环境范围内生长。它可以在包括几种风险因素的环境中存活;因此，它应该产生几种抗菌剂以存活。

芦荟刺激成纤维细胞生长和合成胶原蛋白。刺激纸浆细胞增殖，分化和细胞外基质矿化是其他性质芦荟［16.，18.，39.，40.］．考虑到芦荟有镇痛作用[41.]，它可以在制备运河期间用作润滑剂和光滑的敷料。然而，最好接受调查其对牙科性药物的牙本质的物理性质的影响，以及其对根部骨折的影响。更好地调查。

结论

通过本研究中获得的结果和先前的描述芦荟，它具有可接受的抗生素活性作为牙科治疗过程的候选者。我们的结果表明芦荟能抑制生长吗E. FAECALIS.等于常见的抗微生物剂。然而，建议使用其他常规疗法的协同作用研究。

数据可用性

用于支持本研究发现的数据包括在文章中，并可通过电子邮件提供给通讯作者。

伦理批准

该研究由伦理委员会批准，参考号IR.TBZMED.VCR.REC.1398.401。

利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

致谢

该研究得到了塔德里兹医学科学大学的支持，参考号58127和64650，并在伊朗塔博里兹塔德里兹医学科学大学药物应用研究中心进行。作者感谢所有RDC的员工进行合作。

参考

1. M. Akbari Aghdam，M.H. Soroush Barhaghi，M.Aghazadeh等，“生物膜生产者的毒力基因”粪肠球菌从根管感染中分离株，“细胞和分子生物学，第63卷，第2期5, pp. 55-59, 2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
2. H. S. Kafil和A. M. Mobarez，“肠球表面蛋白在抗生素抗性中的传播Entero-coccus都有效和粪肠球菌分离尿路感染，“开放的微生物学杂志，第9卷，第5期。1，pp。14-17，2015。查看在：出版商网站|谷歌学术
3. A.T.Zenuz，H.Eslai，H.S.Kafil，E. Safari，M. Ghanizadeh和A. Mohammadi，“抗微生物光动力治疗的应用假单胞菌Aeuroginosa和肠球菌fecalis使用高霉素和亚甲基蓝色光敏剂，“生物医学与药理学杂志，第9卷，第5期。2，pp。443-450,2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
4. M.Janani，F.Jafari，M. Samiei等，“光动力治疗抗菌效果的评估与2.5％NaoCl反对E. FAECALIS.- 使用实时PCR技术 - 培养根运河，“临床和实验牙科杂志CHINESE，第9卷，第5期。4，pp。E539-E544,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
5. P.Gholizadeh，H. eslami，M. Yousefi，M.Sasgharzadeh，M.Aghazadeh和H.S.Kafil，口腔微生物组在口服癌症的作用，评论，“生物医学和药物治疗，卷。84，pp。552-558,2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
6. H.S.Kafil，A.Mobarez和M.F.Moghadam，“肠道癌的粘附和毒力因子特性，伊朗临床样本中分离出来”，“印度病理学和微生物学第56期3，第238页，2013年。查看在：出版商网站|谷歌学术
7. H. S. Kafil和A. M. Mobarez，“通过不同毒力型材的尿路感染的肠球菌分离出生物膜形成评估”，“国王沙特大学学报，卷。27，不。4，pp。312-317，2015。查看在：出版商网站|谷歌学术
8. 五，Zand，A. S. Milani，M.Amini等，“光动力疗法的”抗微生物疗效和单一种质生物膜上的次氯酸钠粪肠球菌在不同的发展阶段，”光医学和激光外科，第32卷，第2期5，pp。245-251,2014。查看在：出版商网站|谷歌学术
9. H. S.Kafil，A.Mobarez，M.F.Moghadam，Z.S. Hashemi和M. Yousefi，“庆大霉素诱导EFAA表达和生物膜形成粪肠球菌，“微生物发病机理，卷。92，pp。30-35,2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
10. A. Tonea，M. Badea，L. Oana，S. Sava和D.Vodnar，“胸腺内部药物的抗菌和抗真菌活性，”Clujul医疗，卷。90，没有。3，pp。344-347,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
11. P.Varadan，A.Ganesh，R.Konindala，V.Nagendrababu，R. Ashok和K. deivanayagam，“综合征和氯己定的抗菌效果的比较粪肠球菌:体外研究，”丘疹，第9卷，第5期。10，p。E1805,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
12. N. Karimi, B. Ghanbarzadeh, H. Hamishehkar, B. Mehramuz，和H. S. Kafil，“姜黄提取物纳米结构脂质载体(NLC)的抗氧化、抗菌和物理化学特性”，胶体和界面科学通信，卷。22，pp。18-24,2018。查看在：出版商网站|谷歌学术
13. S. Amjed，K.Junaid，J. Jafar等，“检测Miswak，Kalonji和芦荟对癌细胞系的口服病原体和抗增殖活动的抗菌活性的检测”BMC互补和替代医学，卷。17，不。1，p。265,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
14. A. Henrique Borges，O. Aguirre Guedes，L. Evaristo Ricci Volpato等，“加入芦荟后MTA和波特兰水泥的物理化学特性”伊朗末端杂志，卷。12，不。3，pp。312-317，2017。查看在：谷歌学术
15. S.Jain，N.Rathod，R. Nagi等，“芦荟凝胶对口腔疾病的抗菌作用：体外研究”临床与诊断研究杂志：JCDR，卷。10，不。11，PP。ZC41-ZC4,2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
16. S. Songsiripradubboon，S.Kladkaew，C.Trairatvorakul等，“通过使用脂多糖诱导的牙髓炎症的牙齿在牙齿中使用酸甘油再生刺激牙本质再生，”牙髓学杂志，卷。43，不。7，pp。1097-1103，2017年7月。查看在：出版商网站|谷歌学术
17. S. G. Khatri, S. R. Samuel, S. Acharya和S. T. Patil，“芦荟在智力残疾青少年中的抗菌斑和抗真菌效果:初步研究，”小儿牙科牙科，卷。39，没有。7，pp。434-438,2017。查看在：谷歌学术
18. N. C. Carvalho, S. A. G. Guedes, R. L. C. Albuquerque-Júnior等，“与根管治疗药物和激光光生物调节相关的芦荟细胞毒性和遗传毒性分析，”[光化学与光生物学杂志B：生物学，卷。178，pp。348-354,2018。查看在：出版商网站|谷歌学术
19. A. Ashouri Moghaddam，G.Radafshar，Y.Jahandideh和N.Kakaei，“芦荟凝胶局部应用局部应用的临床评估”慢性牙周炎患者的缩放和根本规​​划的辅助性和根本规划“牙科（Shiraz，伊朗），卷。18，不。3，pp。165-172,2017。查看在：谷歌学术
20. E.Vora，R. Bhatia和S. Tamgadge，“三种不同旋转仪器系统对根牙本质裂缝形成的影响：AN体外学习，”牙髓，卷。30，不。2，pp。103-112,2018。查看在：谷歌学术
21. SK Nezhad，A.T. Zenouz，M. Aghazadeh和H. S. Kafil，“强烈的抗菌活性贯叶连翘L.针对乳酸杆菌的口腔分离株SPP，“细胞和分子生物学，第63卷，第2期11，pp。1-6,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
22. F. Jafari，E. Sobhani，H. Samadi-Kafil，A.Pirzadeh和S. Jafari，“三种新开发的根管封口机的密封能力的体外评估：细菌微透盖研究”临床和实验牙科杂志CHINESE，第8卷，第2期5, pp. 561 - 565, 2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
23. A. Kishen, A. Shrestha，和A. Del Carpio-Perochena，“在注射器冲洗和声波搅动后预备根管中生物膜检测评估抗生素膜有效性的验证”，牙髓学杂志，卷。44，不。2，pp。292-298,2018。查看在：出版商网站|谷歌学术
24. M. Aghazadeh, A. Zahedi Bialvaei, F. Kabiri等，“抗生素膜和抗菌作用的调查Zingiber Officinale.（体外研究），“Jundishapur J Microbiol，第9卷，第5期。2，物品ID E30167，2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
25. S. A. Mohmmed，M. E.Vianna，M. R. Penny，S.T.Hilton，N.J.Mordan和J. C.诺克尔斯，“原位调查”粪肠球菌生物膜通过被动和活性次次氯酸钠灌溉除去了模拟根管模型的侧管，“国际牙髓学的期刊，卷。51，没有。6，pp。649-662,2018。查看在：出版商网站|谷歌学术
26. V.S.Nair，M. Nayak，M.K.Ramya等，“依从性的检测粪肠球菌在使用共聚焦激光扫描显微镜中感染的人牙的感染牙本质：体外研究，“药房与生物科学学报，第9卷，第5期。1，pp。S41-S44,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
27. M. forough Reyhani，Y.Rezagholizadeh，M.R.Narimani等，“不同浓度次氯酸钠的抗菌作用粪肠球菌根系中的生物膜，“牙科研究，牙科诊所，牙科前景，卷。11，不。4，pp。215-221,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
28. R. Roy，M. Tiwari，G. Donelli和V.Tiwari，对抗细菌生物膜的策略：专注于​​抗生物膜代理及其行动机制，“毒性，第9卷，第5期。1, pp. 522-554, 2017。查看在：谷歌学术
29. G. Layton，W.-i.吴，P. R.Selvaganapathy，S.Friedman和A. Kishen，“通过注射器输送和2个超声波辅助灌溉方法产生的流体动力学和生物膜去除：一种新的实验方法”牙髓学杂志，卷。41，没有。6，pp。884-889,2015。查看在：出版商网站|谷歌学术
30. P. Neelakantan，C。Q. Cheng，V. Ravichandran等，“姜黄素和次氯酸钠的光活化，以增强根管牙本肽的抗生素效果”光电诊断和光动力疗法，卷。12，不。1，pp。108-114,2015。查看在：出版商网站|谷歌学术
31. K.Ghatole，R.G.Gowdra，S.Azher，S. Sabharwal，V.Singh和B. Sundararajan，通过掺入银沸石的掺入金标准骨质药物的抗菌活性：体外研究，“国际预防和社区牙科学会杂志，第6卷，第2期1, pp. 75-79, 2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
32. S.L.Kahler，S. Shetty，F.M. Andreasen和B. Kahler，“长期敷料与氢氧化钙对牙齿骨折易感性的影响”，“牙髓学杂志，卷。44，不。3，pp。464-469,2018。查看在：出版商网站|谷歌学术
33. B. Plutzer，P. Zilm，J. Ratnayake和P. Cathro，“牙髓药物的比较效果和次氯酸钠粪肠球菌生物膜”,澳大利亚牙科杂志，第63卷，第2期2, pp. 208-216, 2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
34. A. Vasudeva，D. J.Inha，S.P.Tyagi，N.N.Singh，P. Garg和D. Upadhyay，“用2％氯己定凝胶，氢氧化钙和草药骨质药物消毒”牙本质小管的消毒粪肠球菌：体外研究，“新加坡牙科杂志，卷。38，pp。39-44,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
35. s.m. Osés, A. Pascual-Maté， D. de la Fuente, A. de Pablo, M. A. Fernández-Muiño，和m.t. Sancho，“测定蜂蜜抑菌活性的方法比较金黄色葡萄球菌，“NJAS-Wageningen生命科学杂志，卷。78，pp。29-33,2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
36. M. Balouiri，M. Sadiki和S.K.Ibnsouda，“体外评估抗菌活动的方法：综述，”药物分析杂志CHINESE，第6卷，第2期2，第71-79页，2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
37. S. Jaidka，R. Somani，D. J. Singh，T. Sheikh，N. Chaudhary和A. Basheer，“草药作战E. FAECALIS.- 体外研究，“口腔生物学与颅面研究杂志，卷。7，不。3，pp。178-181,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
38. S. Shahi，A.Bashirazadeh，H. R. yavari等，“不同混合方法对白料理水泥和白色矿物三氧化物聚集体细菌微透额的影响”牙科研究，牙科诊所，牙科前景，卷。11，不。2，pp。84-89,2017。查看在：出版商网站|谷歌学术
39. W. Lowther，K.Lorick，S. D. Lawrence和W.-S.Yeow，“在芦荟中表达生物活性人体干扰素α2，”转基因研究第21卷第2期6, pp. 1349-1357, 2012。查看在：出版商网站|谷歌学术
40. F. Sholehvar，D. Mehrabani，P. Yaghmaei和A. Vahdati，“芦荟凝胶对牙髓干细胞活力的影响”牙齿创伤学，第32卷，第2期5、pp. 390-396, 2016。查看在：出版商网站|谷歌学术
41. M. Tmmalapalli，M. Berthet，B.Verrier，B.L.Dopura，M.S.Alam和B.Gupta，“果胶和明胶的复合伤口敷料与芦荟和姜黄素和姜黄素一样，姜黄素为生物活性剂”，“国际生物大分子杂志，卷。82，pp。104-113，2016。查看在：出版商网站|谷歌学术

版权

版权所有©2020 Negin Ghasemi等人。这是一篇发布在知识共享署名许可协议如果正确引用了原始工作，则允许在任何媒体中的不受限制使用，分发和再现。