成年前不同年龄组小鼠集体居住对小鼠行为的影响

摘要

背景．虽然许多动物管理和伦理指南都推荐人口住房，但不同年龄组小鼠的集体住房对小鼠行为的影响尚未阐明。由于中枢神经系统的发育继续发生在性成熟之前，在混合住房条件下，男性个体的社会地位形成的压力会影响性成熟后的行为。为了评估这些影响，不同年龄的性成熟的老鼠被关在同一个笼子里，成熟后进行一系列的行为测试。结果．研究人员对三组小鼠的研究结果进行了比较:幼鼠与老年鼠同居，老年鼠与年轻鼠同居，以及与同龄鼠同居。与其他小鼠相比，幼年小鼠的体重和活动度更高，握力和类似焦虑的行为也更低。相比之下，老年小鼠在黑暗期表现出较低的体温和增加的攻击性、抗伤害性感受效应，以及在笼子里的活动。结论．因此，不同年龄组的未成熟小鼠的组合壳体会影响成熟后的小鼠行为。适当的最早的住房条件对于消除由年龄相关的社会分层引起的无法控制的偏差至关重要。

背景

大多数用于研究和测试中的动物都保存在小笼子里。然而，许多动物护理和道德指导建议在人口中提出饲养小鼠以减少社会孤立引起的压力[1］．雄鼠对异基因雄鼠具有攻击性[2］．然而，这种行为对于领土动物来说是自然的[3.］．在同一个笼子里长大的雄性个体形成了社会等级[4.］．这种已确立的社会等级是稳定的，低等动物经常受到优势动物的攻击[5.］．

社会等级的形成是许多动物物种的基本生存策略，有助于维持一个安全的社会环境，而不会在群体中产生无谓的冲突[6.］．此外，这种等级制度深深影响着对生存、健康和生殖成功至关重要的资源的获取[7.］．1963年，Tinbergen证明了社会行为受遗传、生理和环境因素的影响[8.］．支配层次可能是由神经机制编码的[9.］．然而，许多社会优越性和自卑的动物健康的影响是未知的。小鼠是神经科学研究中最广泛使用的社会动物，但是在笼子里对小鼠行为发展的社会层次结构的影响尚未得到阐明。

社会关系的建立是哺乳动物社会行为的一个重要决定因素，它在哺乳动物出生后不久就开始了，首先是母亲，然后是家庭和社区的其他成员[10.］．青春期是社会条件易受影响的时期[11.］．在人类中，青春期的特点是持续发展社会能力和行为以及社会认知中脑区的神经杀菌成熟[12.］．社会中断在这一时期可能会损害社会技能的正常成熟，可能有助于自闭症等精神疾病的发展[13.］．

考虑到群居雄性小鼠和孤立雄性小鼠在诸如攻击、运动、类似抑郁行为、新物体识别、恐惧条件反射、刻板印象和可管理性等行为上的差异，动物护理和伦理指南建议群居[14.］．受管制的实验室环境对动物福利至关重要[15.]，它是动物福利科学领域学习的课题[16.］．然而，没有研究过了不同年龄小鼠集体壳体对小鼠行为的影响。与情感和认知功能相关的前额叶皮质的发展通常在性成熟（青春期）之前。在此期间，动物更加不成熟，因此比成熟的动物更容易受到压力17.］．由于这些物种在断奶后生活在各种生态和社会条件下，我们使用成熟前的小鼠进行实验。

在这项研究中，我们旨在描述不同年龄的雄性小鼠成熟后行为的差异，这些小鼠在成熟前被关在一起。我们进行了各种行为测试，以评估这些小鼠的高级大脑功能。这些比较是在三组中进行的:(1)老年鼠与年轻鼠同居，(2)年轻鼠与年老鼠同居，(3)性成熟前同龄鼠同居。目前对住房环境的操纵纯粹是实验性的。本研究结果对实验动物管理具有重要意义。此外，我们希望这些发现能够证明，小鼠模型可以用来阐明社会等级制度背后的生物和环境因素。

2.结果

2.1。不同年龄小鼠群体壳体对体重变化的影响

我们比较了初级，高级和同龄组的一般健康。初级小鼠体重显着高（图1（a）双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．高级小鼠的体重也明显高于同龄小鼠。高级小鼠比同龄和初级小鼠显着降低体温（图1（b）双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．

2.2。基团外壳对神经肌肉力量和侵蚀性行为的影响

我们将小鼠的神经肌肉强度进行了比较。臀部的臀部大小比同龄或高级小鼠显着降低（图1 (c)双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．为了评估痛觉，小鼠被放置在热板上。老年小鼠比同龄小鼠或幼年小鼠表现出明显更高的痛觉阈值(图)1 (d)双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．我们还评估了小鼠的侵略性行为。高级小鼠的咬伤袭击数量明显高于初级小鼠（图1 (e)双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．

２.３.群体住房对高架+迷宫测试性能的影响

在高架迷宫实验中，我们研究了不同年龄的小鼠群体居住对老年和幼年小鼠焦虑样行为的影响。在总行程中没有观察到差异(图)2（a），双向Anova： 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ）,进入张开双臂的条目总数(图2(b)、双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ）,或者花在张开双臂上的时间(图2(c)、双向方差分析: 那 ;后hoc Tukey测试:同龄组与少年组; ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ）在三组中。

２.４.y迷宫测试中群体住房对绩效的影响

我们通过监测Y型迷宫试验中的自发交替行为，在短期空间工作记忆中检测了小组外壳对不同年龄的小鼠的影响。旅行总距离没有显着的互动差异（图2(d)、双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ）,手臂的数量(图2(e)、双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ）,改变的次数(图2(f),双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ）,或交替百分比（图2(g)、双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．

2．5．群屋对露天试验性能的影响

在野外试验中，总行走距离没有显著的组间差异(图3.（a），双向Anova： 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．我们观察到三组在每5分钟内的移动距离没有显著差异(图)3.（b），双向重复措施ANOVA： ： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同，年龄较低， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．在中心区域停留的总时间在小老鼠身上明显高于同龄老鼠(图)3.(c)、双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．我们观察到，在每5分钟的时间段内，年轻小鼠在中央区域停留的时间明显高于同龄小鼠(图)3.(d)双向重复测量方差分析: ： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同，年龄较低， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．中央区域的总条目数量没有显着的互动差异（图3.(e)、双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．

2.6。集团外壳对社会互动试验中性能的影响

在社交性测试中，三组在旅行距离上没有显著差异(图)4.（a），双向Anova： 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．所有三个组的小鼠在笼罩笼罩的笼子周围显示更多的条目，而不是围绕空笼子（图4.（b），双向重复措施ANOVA： ： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同， ;初级， ;高级的， ）并且在有陌生老鼠的笼子周围的时间明显多于在空笼子周围的时间(图)4.（c），双向重复措施Anova： ： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同， ;初级， ;高级的， )．社交指数没有显著差异(图4.(d)、双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．

在社交新颖性偏好测试中，老年老鼠的总行走距离明显高于同龄老鼠(图)4.(e)、双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．在任何三组中，陌生老鼠和熟悉老鼠的笼子周围的入口数量都没有显著差异(图)4.(f)，双向重复测量方差分析: ： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同， ;初级， ;高级的， )．同样年龄的老鼠在两个笼子周围呆的时间相似(图)4.（G））。初级和高级老鼠在包含陌生人鼠标的区域中花费明显较长的时间，而不是包含熟悉的鼠标的区域（图4.(g)，双向重复测量方差分析: ： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同， ;初级， ;高级的， )．社交新颖性偏好指数没有显著差异(图)4.（h），双向Anova： 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．

2.7。集体住房对家笼活动的影响

我们评估了小鼠的家笼活动。在第一个黑暗期，组间的运动活动没有显著差异(图)5（a），第一个黑暗相：双向重复措施Anova： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同，年龄较低， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ;第一光相，双向重复措施Anova： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同，年龄较低， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ;第二次黑阶段，双向重复措施Anova： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同，年龄较低， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．在第一个轻阶段，我们观察到与老年小鼠和同年龄小鼠相比，年轻小鼠的运动活动显著增加(图)5（a）)．在第二个黑暗期间，我们观察到与份龄小鼠相比，初级小鼠的运动活性大幅增加（图5（a）)．在总活动计数中，老年小鼠在黑暗期表现出更多的活动(图)5（b），第一个黑阶段，双向Anova： 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ;第一光相，双向ANOVA： 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ;第二暗期，双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．小白鼠的活动逐渐增加(图)5（b）)．

2.8。基团外壳对小鼠抑郁样行为的影响

我们在三个群体中评估了抑郁的行为。在尾悬浮试验中，初级小鼠的总不动时间明显高于同龄小鼠（图6.（a），双向Anova： 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．在每1分钟的静止时间内，年轻小鼠明显高于同龄小鼠(图)6.（b），双向重复措施ANOVA： ： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同，年龄较低， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．

然而，在盗窃的强制游泳测试中，我们发现在总不动性时间没有显着差异（图6.(c)、双向方差分析: 那 ;后HOC TUKEY测试：相同年龄与初级， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， ）并且在三个群体中每1分钟期间的不动时间（图6.(d)双向重复测量方差分析: ： 那 ;Fisher的LSD测试，年龄相同，年龄较低， ;初级和高级, ;同年龄的和年长的， )．

3.讨论

据我们所知，这是第一个研究表明，同时把不同年龄组的老鼠关在笼子里，会影响动物的成熟后行为。

在社会群体中生活的一个重要特征是，动物必须根据其社会伙伴的相对社会地位迅速而灵活地表现出上下级行为。大鼠和小鼠表现出高度适应性的社会行为[18.］．在人口密度高的情况下，老鼠会变得具有社会容忍能力，并适应独裁的社会制度。在这种制度下，一只雄鼠处于社会统治地位，另一只雄鼠处于从属地位[19.］．然而，以前未调查由于形成这些社会关系而导致的鼠标行为的变化。最近的一项研究表明，根据优势层次结构，小鼠表型根据某些测试而不同[20.］．本研究未报告关于在小鼠的行为表型期间经历过青春期的效果的结果。在本研究中，我们证明，在成熟后，患有较老小鼠的早期小鼠表现出改变的行为。

在这项研究中，我们没有调查同一笼子里的初级和高级小鼠之间的等级关系。在初级和高级老鼠中没有观察到身体损伤。此外，未观察到小鼠之间的频繁突出。随后的研究应侧重于澄清笼内的冲突和组之间的分层关系。

与其他小鼠相比，幼年小鼠体重明显增加。在老鼠身上，体重减轻是一种诱发竞争依赖性的生理劣势[21.］．然而，一项研究也报道，在小鼠的体重和竞争排名之间没有显著的关系[22.］．在小白鼠身上观察到的体重增加可能是由于社会等级的长期压力引起的食欲增加[23.］．此外，与同龄小鼠相比，高级小鼠也表现出体重增加。需要进一步研究来调查为什么初级和高级小鼠的膳食摄入量增加。

高级小鼠表现出比初级小鼠更大的侵略性。侵略在确定住房系统和社会组织方面发挥了重要作用[24.］．一些研究表明攻击性行为和统治地位之间存在联系[25.］．该结果表明，高级小鼠可能通过侵略的方式对同一笼子的初级小鼠进行统治性。

老鼠的体温随着压力而升高[26.］．在这项研究中，高级小鼠的体温显着降低。这结果表明，高级小鼠的负荷应力显着低于其他小鼠。与其他小鼠相比，初级小鼠也表现出较低的握力。由于发育应力，小鼠体的生长受到生长激素的分泌减少的影响[27.］．因此，小鼠握力的下降可能是压力和社会地位接受的结果。

与同龄饲养的小鼠相比，初级小鼠表现出抗血汗效果的变化。社会失败压力不会改变小鼠的热板试验中的阈值[28.］．增加对疼痛的易感性增加了抑郁症状的行为[29.］．因此，小老鼠可能长期处于压力之下。相比之下，老年小鼠在热板测试中的阈值明显高于其他小鼠。身高和体格等身体特征会影响动物的社会地位。这一结果表明，年长的老鼠保持着社会优势。

高级小鼠在黑暗时期显示活动增加。主导个人表现出更高的运动活动和探索性活动[30.］．因此，家庭笼子内的鼠标组的活动级别的差异可以归因于社会层次结构的差异。

在野外实验中，小老鼠的类似焦虑的行为比同龄老鼠要低。已知，在童年早期暴露于压力下的小鼠中，类似焦虑的行为会减少[31.］．在我们的研究中，三组在升高的加迷宫试验和Y型迷宫试验中没有出现焦虑的行为差异。开放场测试用于研究广泛区域中的焦虑性行为，光明过渡试验是一种行为实验，可在明亮的地方测量焦虑。有几种类型的焦虑形式的行为，如焦虑的高度，焦虑对明亮的地方，以及对大物体的焦虑。目前结果的差异被认为是由于高位和光阶段引起的焦虑[32.］．最终，这些结果表明，与其他年龄组的住房也会改变小鼠的焦虑行为。

当同窝动物被关在笼子里时，社会行为在发育阶段会发生变化，并随着发育而减少[33.］．在同龄老鼠中，对陌生人小鼠的社会性降低，而少年和高级老鼠具有更高的社会性和对陌生人小鼠的关注。本研究表明，不同年龄组的集体住房也可能影响社会行为。

据报道，在四只雄性老鼠中，社会地位较低的个体表现出更明显的类似焦虑和抑郁的行为[4.］．此外，在成年啮齿动物中，反复暴露于社会失败压力下会引发一系列抑郁和不安的行为，包括快感缺乏、焦虑和社交回避[34.］．与先前的研究一致，与同龄小鼠相比，本研究中的初级小鼠还显示出尾悬浮试验中的抑郁状行为增加。初级小鼠的体重较高，握力低于其他小鼠。物理和神经肌肉差异可能影响了抑郁症状的行为的结果。需要进一步的研究来阐明初级小鼠的物理特征。

居住条件，例如老鼠的居住环境和隔离的居住环境，极大地影响老鼠的行为[35.］．此外，混合和喂养不同基因型和表型动物的影响是一个日益增长的研究领域。例如，转基因小鼠的记忆功能受损可以通过与野生型小鼠一起饲养来改善[36.[通过将其与C57BL / 6小鼠一起将BTBR小鼠株的社会缺陷缓解[37.］．另一方面，C57BL / 6和DBA / 2线的同时壳体可能导致C57BL / 6小鼠的应力，并且与焦炭发生相关[38.］．研究表明，不同表型甚至相反的小鼠品系的混合会影响社会环境、行为和生理。然而，与不同年龄的个体生活在一起对小鼠行为的影响尚不清楚。一群家鼠形成了严格的社会等级制度，因为它们需要压制分享笼子的其他个体。在这种情况下，基于战斗和跟踪的优势等级已经被确定，这些老鼠的敌对关系被组织起来[39.］．

在具有社会层次结构的动物中，前额外的皮质调节了对社会地位的认可[40］．当动物有机会形成社会等级时，前额叶皮层、杏仁核和下丘脑在调节社会灵活性方面非常重要[41.］．据报道，老鼠前额叶皮层的损伤会增加从属行为，并与社会地位的下降有关[42.］．一些大脑区域(尤其是调节情绪和认知功能的前额叶皮层)正处于发育到成熟的阶段[43.］．前额皮质的发育发生在青春期，这是皮质中最后成熟的结构[44.］．因此，在此期间影响小鼠的环境因素在组织学和功能上影响其脑发育。事实上，在青春期期间，社会逆境包括战斗和社会孤立，显着增加了青春期和成年期的抑郁和焦虑状症状[45.］．前额皮质功能障碍会导致神经心理疾病，如精神分裂症[46.］．社会地位可能在慢性压力和死亡率之间的强负相关中起到中介作用[47.］．基于这些发现，本研究表明有必要重新考虑未成熟小鼠的居住条件，以确保其大脑的健康发育。

实验室啮齿动物的集体居住是法律的基本要求。根据建议，我们同意老鼠这种群居动物应该在群体中饲养。然而，我们的结果表明，在考虑了年龄差异后，需要将未成熟的小鼠安置在家中。无论如何，各群体的住房条件需要统一。这项研究引起了人们对用老鼠处理实验结果的关注。研究人员有时按体重对老鼠进行分组。目前的研究结果表明，这些操作可能会混淆实验结果。因此，需要建立动物的住房条件，以尽量减少年龄差异的影响。

4.结论

本研究表明，成熟后的小鼠的行为显着变化，这取决于人口住房下不同年龄小鼠之间形成的社会等级。使用动物研究获得的结果的再现性可能受到在成熟前的动物的壳体条件的影响，特别是通过在笼子中不同年龄的动物存在。在鼠标成熟之前适当的住房条件对于消除由年龄相关的社会层次结构引起的无法控制的偏差是重要的。

5.方法

5.1。动物

所有动物实验都是按照美国国立卫生研究院(NIH)实验室动物护理和使用指南(NIH出版物第80-23号，1996年修订)进行的，并由川崎医学院高级研究中心动物实验委员会批准。所有的努力都是为了尽量减少被使用的动物数量和它们的痛苦。动物从查理斯河实验室(神奈川，日本)购买，关在笼子里(每个笼子5只)，并提供食物和水随意在23°C-26°C的12小时光/暗循环下。在实验结束时，通过二氧化碳诱导的麻醉下宫颈位错安乐死小鼠。

5.2。集团房地产

我们使用雄性C57BL/6N小鼠。这些动物被随机分配到初级组、高级组或同龄组(见图)7.)．（1）对于初级小鼠组，两只3周龄小鼠和两个6周龄小鼠在每个笼子里都被容纳在一起。我们养了3周龄的老鼠，直到他们是13周龄（图7.(a))。(2)老年组，每个鼠笼共饲养2只6周龄小鼠和2只3周龄小鼠。我们将6周龄的老鼠饲养到13周龄(图7.(b))。(3)同龄小鼠组，每个鼠笼共饲养4只6周龄小鼠。我们将6周龄的老鼠饲养到13周龄(图7.(c))。每7天更换一次笼内的垫料。只有笼子里的老鼠没有明显的伤痕被用于实验。

老年小鼠(6周龄小鼠)在3周时断奶，同龄小鼠饲养至6周龄。

5．3.行为测试

在昼夜循环的光相期间进行所有行为测试（09：00-16：00）。每个行为测试从未来至少1天分离。以随机顺序测试小鼠。为了防止由于嗅觉提示引起的任何偏差，在测试后用70％乙醇和水用70％乙醇和水清洗该装置。行为测试按照下面描述的顺序进行。行为测试在13至14周之间进行。在测试阶段未改变笼状况。

5.4。一般健康和神经系统筛查

记录身体特征，包括体重和直肠温度。根据之前的一项研究，使用握力测试来检查神经肌肉力量[48.］．用握力计评估前肢握力。老鼠被举起来，抓着尾巴，这样它们的前爪就能抓住铁丝网;然后，他们被轻轻地向后拉，直到他们松开网格。小鼠前肢施加的峰值力记录为牛顿(cN)。

5.5。高架迷宫测试

高架迷宫试验是一种广泛用于啮齿类动物评估焦虑样行为的试验[49］．该装置包括两个张开的手臂( ）两臂大小相同，有30厘米高的透明墙。手臂由白色塑料板构成，并被抬高到离地面40厘米的高度。同一类型的手臂彼此相对。每只老鼠被放置在迷宫的中央广场，面对着其中一只手臂，并被允许在两只手臂之间自由移动10分钟。使用视频跟踪软件(anyi - maze, Stoelting Co.， Wood Dale, IL, USA)记录并分析手臂进入的数量、行走的距离(m)和在张开手臂中花费的时间。

5.6。开场测试

野外试验是一种广泛用于啮齿类动物评估焦虑行为的试验方法[50］．在开场测试中，将每只鼠标置于设备的中心，该中心由高墙包围的平方区域组成（ )．记录旅行总距离(m)和在中心区域花费的时间(s)。中心区域被定义为 位于球场中心的区域。试验室内照明为100勒克斯。数据收集时间超过30分钟。使用ANY-MAZE软件自动进行数据分析。

5.7。Y-Maze测试

使用y型迷宫仪测量空间工作记忆(臂长40 cm;臂底宽度:3厘米;臂上宽:10厘米;墙高:12厘米)。小鼠被放置在y迷宫场的中心。在测试室内，视觉线索被放置在迷宫周围，并且在整个测试过程中都是恒定的。小鼠没有学习经验。使用ANY-MAZE软件自动记录和分析旅行的总距离(m)、条目的数量和变更。数据收集时间为10分钟。

5.8。社会互动测试

该装置由一个矩形的平行六面体( )．将每只鼠标放入盒子里10分钟，自由地探索习惯的区域。在社交性测试中，没有先前与主题鼠标接触的不熟悉的C57BL / 6N男鼠（陌生人鼠标）被放入其中一个透明的笼子（ 那在每个侧舱的角落处，具有直径为1cm的几个孔。陌生人鼠标封闭在透明笼中，允许鼻子接触通过杆，但防止战斗。将主体鼠标放在中心，探索整个盒子，可持续6分钟（可信度测试）。矩形区域的一侧被识别为陌生人区域，另一侧作为空区域。测量每个腔室中的时间和在每个腔室周围在6分钟的会话期间花费的时间。在前6分钟的会议之后，将第二个不熟悉的鼠标放在前6分钟期间已经空的腔室。第二个陌生人封闭在一个相同的透明笼中。因此，主题鼠标在第一，已经研究的鼠标（熟悉的鼠标）和新颖的不熟悉的鼠标（陌生人鼠标）之间进行了选择。如上所述（社会新颖性偏好测试）测量在第二次6分钟会议期间在每个腔室中花费的时间量。数据记录在视频上并使用任何迷宫软件进行分析。

5.9。家庭笼活动测试

为了测量运动，小鼠适应单一的住房环境，并监测它们的行为2天。使用光束活动系统(ACTIMO-100;BRC Co.，名古屋，爱知县，日本)，并每隔30分钟记录一次活动计数。

5.10。棉花咬芽试验

根据之前的一项研究，他们使用咬棉签测试来检查攻击行为[51］．实验人员将老鼠握在手中，并将无菌棉签贴在它们的脸上。咬棉花芽被认为是一种攻击性行为。这些小鼠进行了10次测试。对咬人攻击总次数进行分析。

5.11。热板测试

热板试验用于评估痛觉或对疼痛刺激的敏感性。老鼠被放在热板上 那记录了第一次后爪反应的潜伏期。后爪的反应是抖脚或舔爪子。

5.12。尾悬架试验

尾悬浮试验是啮齿动物广泛用于啮齿动物以评估抑郁样行为的测定方法[52］．每个小鼠在尾部以上的尾部悬挂在地板上方60厘米处，在白色塑料室中，使用从尾部的尖端放置1厘米的粘合带。它的行为记录了6分钟。通过摄像机捕获图像，并测量不动时间。在该测试中，“不动期”定义为动物停止努力≥1s的时期。数据采集​​和分析自动使用任何迷宫软件进行。

5.13。Porsolt强迫游泳测试

Porsolt强迫游泳试验是一种广泛用于啮齿类动物评估抑郁行为的试验[53］．Porsolt强制游泳测试的仪器包括四个有机玻璃圆柱体( )．根据之前的一项研究，这些圆柱体被注满了水(23°C)，高度可达7.5厘米[53］．小鼠被放置在圆柱体中，在6分钟的测试期间记录它们的行为。使用ANY-MAZE软件评估静止时间。

5.14。行为测试的统计分析

采用SPSS软件(IBM Corp.，东京，日本)进行统计分析。数据分析采用双向方差分析(ANOVA)，然后是Tukey检验，双向重复测量ANOVA，然后是Fisher的LSD检验，学生 -测试或配对 -测试。一种值<0.05为有统计学意义。数据以箱形图显示。

缩写

方差分析:	方差分析
BRC:	生物研究中心
费舍尔的LSD：	费雪最不显著的差异
国家卫生研究院:	国家卫生研究所

数据可用性

所有相关数据都在稿件范围内。

伦理批准

一种ll animal experiments were performed in accordance with the U.S. National Institutes of Health (NIH)—Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publication No. 80-23, revised in 1996) and approved by the Committee for Animal Experiments at the Kawasaki Medical School Advanced Research Center.

的利益冲突

两位作者宣称没有相互竞争的利益。

作者的贡献

所有作者都有完全访问所有研究数据的权限，并对数据的完整性和数据分析的准确性承担完全责任。h.u.， M.O，和T.I.在研究概念化和设计方面做出了贡献。H.U. S.S.和Y.T.对数据的获取做出了贡献。H.U. S.S.和Y.T.在数据分析和解释方面做出了贡献。h。u。和作案手法都参与了手稿的起草。s.m.， n.k.， k.w.， y.m.和T.I.对手稿的重要知识内容作出了重要的修订。H.U.和S.S.对统计分析有贡献。作案手法和作案时间对研究监督有帮助。

致谢

我们感谢Kawasaki Medical School Central研究所提供仪器开展这项工作。作者想感谢编辑（http://www.editage.jp.）英语语言编辑。这项工作得到了来自三洋广播基金会的补助金和冈山医疗基金会的支持。

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