从脂肪衍生的间充质干细胞在Photogged大鼠皮肤中的抗衰子属性

摘要

脂肪来源干细胞(ADSCs)已被证明是皮肤再生的可能候选细胞。然而，adsc来源的外泌体对照相皮肤的影响仍有待充分阐明。本研究旨在确定adsc来源的外泌体对光老化皮肤的抗衰老作用。从健康女性的脂肪组织中分离出人ADSCs，并进行体外培养。然后，从培养的ADSCs中提取外泌体，经超离心法纯化，并通过透射电镜检查细胞形态和特异性生物标志物的鉴定进行验证。同时选择最佳外泌体浓度和处理时间。照片化的皮肤模型是通过对斯普拉格-道利大鼠进行紫外线B辐射创造的。外泌体以单一治疗剂量注射到光化后的皮肤中。HE染色观察表皮和真皮的厚度。real-time PCR检测I型胶原、III型胶原及基质金属蛋白酶(MMP-1、MMP-3) mRNA的相对表达量。 In the rat model of photoaged skin, the injected exosomes markedly decreased the epidermal thickness and increased the dermal thickness of the photoaged skin 7 days after treatment. Moreover, the proportion of the stratum corneum of the epidermis was decreased. Furthermore, real-time RT-PCR showed that the mRNA expression of type I collagen was increased and that of type III collagen, MMP-1, and MMP-3 was decreased. Our results demonstrate that ADSC-derived exosome treatment could significantly improve skin photodamage and that ADSC-derived exosomes may be a potential agent for photoaged skin treatment.

1.介绍

随着年龄的增加，人体的老化是不可避免的，并且首先在皮肤中更容易观察，这是人体中最大，最浅的器官。对此的原因可归因于内源性（基因遗传和表达）以及外源性因素（皮肤暴露于外部环境的各种影响）[1］．在这两种因素的共同作用下，衰老的皮肤会改变其外观、功能和结构。光老化是一个重要的外源性因素，而阳光中含有的UVB在皮肤老化引起的皱纹中起着至关重要的作用[1］．光老化是由光辐射引起的，表现为革质、粗糙的皱纹、不规则的老年斑和角化过度。组织学表现为表皮不均匀增厚，皮肤毛细血管网紊乱，皮肤I型胶原含量减少，III型胶原含量相对增加，网状纤维增多，弹性纤维变性，皮脂腺堆积成团。此外，紫外线照射还可以刺激真皮的炎症反应，激活血管周围的炎症介质和细胞因子，从而产生溶解酶，缓慢降解真皮成分。这些变化是暴露在光线(主要是紫外线)下，随着时间的推移而缓慢发生的过程。在皮肤光老化过程中，由于细胞外基质连续或重复的蛋白质水解而导致的不平衡状态，导致真皮修复不完全，也是皱纹形成的重要原因[2］．

近年来，皮肤光老化的研究和治疗取得了进展，干细胞的应用也越来越广泛。随着干细胞移植用于临床创伤治疗的发展，其在临床应用中的一些不足也逐渐显现出来。例如，干细胞在提取后必须在短时间内移植，因为其生存条件非常苛刻，使用和保存都很不方便。同种或异种来源的干细胞移植可能引起严重的免疫排斥反应，并可能增加病毒感染宿主的风险。此外，相关研究发现，直接分化和再生促进创面愈合并不是干细胞促进创面愈合的主要作用。相反，干细胞促进受损组织修复的主要机制是通过受损组织旁分泌的一些活性物质，其中外泌体是重要的组成部分。外泌体在伤口愈合和治疗中具有类似于干细胞移植的功能[3.由于保存时间长、生理特性稳定、来源广泛、提取规模大，具有一定的应用潜力。它们是直径为30 ~ 150 nm的膜状体。干细胞来源的外泌体具有与其母细胞相似的生物学功能[4.]，含有大量各功能阶段的遗传物质，其含量随分泌细胞类型的不同而不同。它们主要包含蛋白质、microrna、RNA、DNA和脂质。然而，很少有研究报道外泌体对光老化皮肤的影响。本研究采用外泌体皮下注射治疗uvb诱导的SD大鼠皮肤光老化模型，观察外泌体对皮肤光老化的影响。

2。材料和方法

2.1。样本来源

脂肪组织取自暨南大学第一附属医院整形外科6例28-34岁的健康年轻女性，经每位患者知情同意。

2．2．体外脂肪组织中ADSCs的培养

进行脂肪吸入以从健康成年女性的大腿或下腹部提取皮下脂肪组织。除去纤维状结缔组织组分，将组织置于离心管中并用磷酸盐缓冲盐水（PBS，Gibco公司，USA）洗涤2-3次。加入相同体积的1％I型胶原酶（USA，USA），并使搅拌消化在37℃下进行30分钟。将混合物离心 10分钟。完整的媒体（Dulbecco的改良Eagle的媒介（Gibco Company，USA）加上10％胎牛血清（Gibco公司，美国）加上1％笔/ Strep（Gibco公司，美国））以终止消化。过滤通过200目筛后，将混合物离心 10分钟后，所得沉淀物作为脂肪组织的SVF(基质血管部分，很容易通过酶消化从人脂吸物样品中获得)[5.］．

SVF在完全培养基中重悬，接种到细胞培养瓶中作为原代细胞(P0)，在5% CO中培养₂孵化器。培养基每3天更换一次，直到细胞达到80-90%汇合时，按1:3传代。流式细胞术对P3代细胞进行表征，并进行成脂和成骨诱导[6.］．

2.3。ADSC衍生外泌体的提取和培养

P3代ADSCs培养。当细胞融合到70-80%时，用PBS冲洗两次，用无血清培养液代替。48 h后，收集上清进行处理，获得的外泌体溶液在-80℃保存。然后，用离心法将悬浮细胞移出( 那10分钟,4°C)。进一步离心清除细胞碎片( 那60分钟，4°C）。通过0.22过滤细胞培养上清液 μgydF4y2BaM过滤器。将过滤的细胞上清液置于离心机瓶中，称重，并离心 和4°C 2小时（Optima XPN-100 Beckman Coulter，Brea，CA，USA）。将PBS加入离心机瓶中以洗涤通过超速离心获得的外出溶液。再次在离心机瓶中洗涤外渗溶液并称重，重复超速离心步骤。上清液被小心地除去，用Dulbecco的PBS轻轻加入以重新悬浮外出颗粒，得到外出溶液。将该溶液等分为Eppendorf管，并在-80℃下储存直至使用[7］．

2.4。ADSC衍生的外来体的表征

目前，外泌体的分离和鉴定还没有标准化的过程。大多数研究人员使用了两种或两种以上的方法的组合来进行表征，如表面标记物的流式细胞术测量、电子显微镜和NTA(纳米颗粒跟踪分析)。通过透射电子显微镜分析、CD63和CD81的流式细胞分析和NanoSight粒子电子显微镜(Malvern Analytical, Malvern, UK)对外泌体悬浮液进行了表征。

NTA使用NanoSight NS300 (Malvern Panalytical, Malvern, UK)分析adsc衍生的外泌体的大小分布和浓度。用1ml注射器将adsc来源的外泌体溶液注入激光腔内，记录三次，持续30秒。采用NTA 3.0软件测定adsc来源外泌体的模式、平均大小和浓度。

使用JEM-1200EX电子显微镜(JEOL, Tokyo, Japan)通过透射电子显微镜(TEM)观察adsc来源的外泌体的形态。首先，adsc来源的外泌体在formvar/碳涂层网格中吸收10分钟，并用2%多聚甲醛固定。用2%乙酸铀酰负染10分钟后，在60 kV的透射电镜下观察adsc来源的外泌体。Zeta电位用Zetasizer Nano ZS (Malvern Panalytical, Malvern, UK)测量。

非染色的外出组被用作阴性对照和标记的NC。CD63和CD81抗体（Becton，Dickinson和Company，USA）分别被染色并标记为CD63和CD81。通过流式细胞术检测CD63和CD81抗体（BD Cleasti C6流量筛分，Becton，Dickinson和USA）。

2.5。与人成纤维细胞的Adsc衍生的外泌体的共培养

通过BCA测定（北京ComwoIch Co.，中国）测定外出组悬浮液的蛋白质浓度。浓度分为12.5,25,50,100和200 μgydF4y2Ba与人成纤维细胞的共培养的g / ml。CCK8测定用于测量1,3,5和7天的细胞增殖速率，筛选最佳外出浓度。

2.6。动物实验

SD大鼠(雌性大鼠15只，6周龄，体重 那通过广东医学实验室动物中心提供，批准号Syxk（广州，中国）2017-0174）用于该研究。他们在济南大学实验动物管理中心在特定的无理体环境中提出。

2.7。动物群和SD大鼠皮肤拍摄模型的构建

十五周龄旧的SD大鼠被安置在济南大学的实验动物管理中心。它们在特定病原体环境中被调节1周，随机分为正常对照组，模型组，生理盐水对照组和ADSC衍生的外侧治疗组。每组含有3只RAT。除了正常对照组外，用定制的UVB灯箱（UVB光波长290-320nm，15W，2个灯泡，灯箱高50cm）照射实验组;SD大鼠可以在灯箱中移动。辐照议定书如下[8]: 60 mJ /厘米²在第1周，120 MJ / cm²第2周，180 mJ/cm²在第3周，和240 mJ / cm²4-8周，每周5次，共8周，总照射剂量7.8 J/cm²．

2.8。ADSC衍生的外腔注射治疗

注射前3天终止UVB照射。按照上述注射方法和剂量，用10%水合氯醛麻醉SD大鼠，100μgydF4y2Ba在不同浓度下皮下注射到大鼠的背部皮肤上的外外悬浮液。用当量的正常盐水注入正常的盐水对照组。使用皮肤活检冲头在注射后的7,14和28天的皮肤活检冲头冲压直径6mm的一块组织，并将样品固定在4％多聚甲醛中用于石蜡切片。28天后（将大鼠安乐死）处死所有动物，并且将剩余的皮肤组织冷冻在液氮罐中直至使用。

2.9。皮肤样品的制备和测量

皮肤标本在4%多聚甲醛中固定48小时，脱水、清除，石蜡包埋。石蜡块连续切片(4μgydF4y2Bam）并粘附在用聚赖氨酸处理的载玻片上。将每组石蜡切片用二甲苯的二甲苯化，通过乙醇梯度水合，用苏木精和0.5％曙红溶液染色，通过乙醇梯度脱水，并用中性胶密封。使用倒置相位对比显微镜（日本Olympus Corporation）拍摄幻灯片。使用imagej软件（NIH，Bethesda，MD，USA）测量表皮和真皮的厚度。

2.10。西方墨点法

组织在含有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液中均质，4℃超声15分钟提取蛋白，检测蛋白浓度。蛋白用10% sds -聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离，然后转移到硝基纤维素膜上。阻断后，用I型胶原一抗(1:1000;Abcam)、collagen III(1:10 00)、MMP-1(1:10 00)和MMP-3(1:10 00)在4°C过夜，然后用酶联二抗。使用ECL Prime (GE Healthcare, Little Chalfont, UK)进行检测。以GAPDH作为负荷对照。

2.11。实时聚合酶链反应

检测I型胶原、III型胶原、MMP-1、MMP-3 mRNA的相对表达量。采集保存在液氮中的皮肤组织(50 mg)。从皮肤组织样本中提取总RNA。用1%凝胶电泳法测定提取的总RNA的质量。确定浓度后，使用反转录试剂盒(Toyobo, Osaka, Japan)进行反转录。逆转录后，采用SYBR Green I荧光嵌合染色法进行cDNA PCR检测。引物序列如下:内参β-Actin上游底漆：5 -gagtacaaccttcttgcagctc-3 那下游引物:5 -CATACCCACCATCACACCCTG-3 那扩增子长度:198个碱基对(bp);型胶原上游引物:5 -GATGGACTCAACGGTCTCCC-3 那下游引物:5 -Cggcactatttgagactt-3. 那扩增子长度:143 bp;ⅲ型胶原上游引物 -CTGAAGGGCAGGGAACAACT-3 那下游引物:5 -ATCCCGAGTCGCAGACACATA-3 那扩增子长度:270bp;MMP-1上游引物:5 -GGCTACCAGCTCATACAGTTTCC-3 那下游引物:5 -CCTCATAGCACTCAGGGTTTCAG-3 那扩增子长度:223 bp;MMP-3上游引物:5 -CAGGCATTGGCACAAAGGTG-3 那下游引物:5 -CTGAAACACACGACGCCTTC-3 那和扩增子长度：174 bp。2^-ΔδCT.方法用于计算。

2.12。免疫组织化学分析

采集皮肤标本石蜡切片，二甲苯脱蜡，乙醇梯度水合，置于pH 6.0的柠檬酸钠缓冲液中，转移到微波炉中提取抗原10分钟。自然冷却至室温后，置于0.3% Triton X-100中室温孵育15分钟。玻片浸泡在3% H中₂O₂20分钟除去内源性过氧化氢酶，然后在室温下用山羊血清阻断溶液封闭20分钟。将兔抗鼠Ki67多克隆初级抗体工作溶液（1：100稀释，Abcam，UK）加入到载玻片中，将其在4℃下温育过夜。第二天，加入了载玻片，山水抗兔IgG抗体（武汉Servicybio技术有限公司，武汉，中国）洗涤，将载玻片在37℃下孵育30分钟。DAB颜色试剂用于显色。通过乙醇梯度脱水，通过乙醇梯度和二甲苯清除脱水。将载玻片用中性苯乙醚密封并通过显微镜观察。细胞核中的棕色黄色被认为是阳性染色。从每个载玻片中随机选择10个高倍率（×100）字段，确定每个场中的阳性细胞的数量。

2.13。统计数据

SPSS 13.0统计软件（SPSS，Inc.，Chicago，IL，USA）用于分析。测量数据表示为 （ )．各组数据采用完全随机化设计进行方差分析。差异与 被认为是统计学意义的。

结果

３.１.培养的ADSCs的形态学观察和特性分析体外

原代培养的ADSCs在粘附后完全伸展，呈长梭形形态，并单独或菌落生长。流式细胞术标记表面标志物CD29、CD90、CD105阳性表达，阳性率分别为99.98%、99.5%、99.75%。CD34、CD45和人白细胞抗原- dr表达均为阴性，表达率分别为2.32%、1.89%和2.34%(图3)1（a）)．P3细胞经成脂诱导后，用油Red O染色，镜下观察油滴状脂肪组织。成骨诱导后，茜素红染色显示骨组织聚集呈红色，说明实验组获得的细胞为ADSCs(图)1 (b))．

３．２．ADSC衍生的外来体的表征

目前，外泌体的分离和鉴定还没有标准化的过程。大多数研究人员使用了两种或更多种方法的组合进行了表征，例如流式细胞术测量表面标记，电子显微镜和NTA。CD63和CD81属于外科表面四蛋白蛋白超家族，是最常用的蛋白质，用于鉴定外来体。表面标记物的流式细胞术测量结果显示了超速离心提取物中CD63和CD81的阳性表达（图2（a）)．透射电镜显示，超离心法得到的沉淀含有直径30 ~ 150 nm的双凹面圆盘状小泡，这与外泌体的形态特征一致(图)2（b）)．数字2（c）显示了使用NanoSight测量的外泌体粒径分布和粒子浓度。悬浮体中的颗粒呈多峰分布，粒径为 ．大多数颗粒在外泌体（30-150nm）的范围内。含量最高的颗粒的直径约为114nm;其中，10.7％的颗粒在30-150nm范围内。

表面标志物流式细胞术的结果表明，通过超速离心所获得的沉淀对于外泌体表面标记蛋白CD63和CD81是阳性的。纳米透视分析显示，大多数微粒在外来体的直径。因此，通过超速离心所获得的沉淀物含有ADSCs释放的外泌体。

３．3.不同浓度adsc来源外泌体共培养成纤维细胞的增殖曲线

将AdSC衍生的外泌体的浓度分为12.5,25,50,100和200 μgydF4y2Ba与成纤维细胞共培养的g / ml。CCK8测定用于测量1,3,5和7天的细胞增殖速率。数字2（d）显示，当外泌体蛋白浓度为25μg/mL时，成纤维细胞增殖率明显增加。对0 g/mL和25 g/mL两组进行重复测量设计的方差分析。结果显示，两剂量组间的差异随时间而变化，差异有统计学意义( 那 )．

3．4．ADSC-Derived Exosomes对SD大鼠皮肤表皮厚度的影响

苏木精和曙红染色表明，在用adsc衍生的外索氏素治疗后，皮肤的整个表皮层显着增厚，并在治疗后改变（图3（a）)．统计学分析表明，Adsc衍生的外腔治疗组中表皮的厚度小于治疗后7,14和28天的对照组中的表皮少于对照组（ ），表明ADSC衍生的外腔治疗降低了相表皮肤层厚度的相似皮肤层（图3（b）)．

3.5。用AdSC衍生的外泌体处理后SD大鼠皮肤的皮肤厚度

苏木精和曙红染色表明，在用Adsc衍生的外索物治疗后，皮肤的整个皮肤层的皮肤显着减薄，并在治疗后改变（图3（a）)．统计分析显示，adsc来源外泌体治疗组真皮厚度在治疗后7、14、28 d均高于对照组( ），这表明adsc来源的外泌体治疗增加了光老化皮肤的真皮层厚度(图)3（c）)．

3.6。表皮的层基底细胞中核增殖分析

UVB照射后，表皮基底层中处于增殖状态的细胞核数量显著增加，细胞排列紊乱。经adsc来源的外泌体治疗后，基底层中处于增殖状态的细胞核数量显著减少。经7天处理后，adsc来源的外泌体处理组的这一数字下降，说明adsc来源的外泌体处理能有效抑制UVB照射引起的基底层细胞异常增殖(图)3（a）)．

3.7。在真皮中，I型胶原蛋白，III型胶原，MMP-1和MMP-3 mRNA相对表达的变化

在治疗28天后，加工型I型胶原蛋白的浓度增加，而III型胶原蛋白减少，mRNA相对表达的差异是显着的（ )．涉及胶原降解的MMP-1和MMP-3 mRNA的相对表达减少;只有外腔治疗组才显示出显着差异（ )．这表明adsc来源的外泌体可以上调I型胶原mRNA的相对表达，下调III型胶原、MMP-1和MMP-3 mRNA的表达(图)4（a）-数字4 (d))．

3.8。在真皮中，I型胶原蛋白，III型胶原，MMP-1和MMP-3 mRNA的相对蛋白表达的变化

治疗28天后，较低的真皮中I型胶原蛋白的浓度增加，而III型胶原蛋白减少，蛋白质相对表达的差异是显着的（ )．涉及胶原降解的MMP-1和MMP-3蛋白的相对表达减少;只有外腔治疗组才显示出显着差异（ )．这表明ADSC衍生的外泌体可以上调I型胶原蛋白的相对表达，并下调III型胶原蛋白，MMP-1和MMP-3蛋白的表达（图5.)．

4.讨论

我们发现，adsc来源的外泌体可以有效改善由光老化引起的表皮和角质层增厚、基底层细胞核异常增殖、真皮变薄等现象，从而可能有助于对抗皮肤光老化。表皮的正常更新大约在28天内发生。然而，当异物侵入角质层或破坏角质层时，基底层细胞分裂加速，从而加快更新速度，排除异物，促进修复。对皮肤的化学或物理刺激会导致表皮增生和角化异常，导致角质层异常增厚。在我们的研究中，UVB照射后SD大鼠表皮组织明显增厚。这一现象在表皮的基底层和角质层同时发生，角质层细胞所占比例明显增加。此外，UVB照射后表皮基底层细胞排列紊乱，部分细胞出现核形态变化。紫外线诱导的角质形成细胞DNA损伤可在缺乏修复的情况下导致细胞异常增殖[9那10.］．经adsc来源的外泌体收集和皮下注射后，表皮基底层中处于增殖状态的细胞数量显著减少。这一效应在adsc来源的外泌体治疗组表现明显，增殖状态的细胞核数量与正常皮肤组织中的细胞核数量基本相同，表明adsc来源的外泌体在对抗紫外线对表皮的损伤方面具有重要的调节作用;但其作用机制尚需进一步研究。这些作用可能通过两种主要途径来抵抗紫外线对表皮的损伤和促进表皮组织增厚。第一种是通过有效抑制基底细胞异常增殖，进而有效抑制表皮细胞过度角化。第二种是调节性的重新校准，它能促进表皮组织细胞的角化和更新速度，从而促进表皮细胞的更新和恢复表皮的稳态。这两种机制都改善了皮肤光老化的效果，促进了伤口愈合，而光老化和伤口愈合是皮肤的生理过程，具有一定的机制。Senescence-associatedβ- 高乳糖苷酶（SA-β-半乳糖)的活性被评估为自然衰老的标志。外泌体治疗与β-半乳糖苷酶有降低SA-表达水平的作用β-gal [11.］．据报道，Adsc衍生的外来体促进造粒组织的成纤维细胞增殖，血管生成和生长和上皮化，从而促进伤口愈合[12.那13.］．本实验使用人ADSC-EXO，因为外泌体具有免疫原性低的特点，保存时间长，生理特性稳定，来源广泛，提取规模大，具有应用潜力。

在我们的实验中，皮下注射ADSC衍生的外来体在SD大鼠中增加了皮肤厚度，促进了真皮中I型胶原mRNA的表达，并抑制III型胶原mRNA的表达。胶原蛋白，主要是I型（85-95％）和III型胶原（10-15％）占人真皮中蛋白质含量的约90％。随着年龄的增加，皮肤中的I型胶原蛋白含量降低，而III型胶原蛋白的比例增加;这在暴露于UVB的网站中更加明显。降低的胶原蛋白含量和不同组分的胶原蛋白的变化导致皮肤变得松弛和塌陷，导致皱纹形成[14.］．ADSC衍生的外泌体可以有效地提高皮肤组织中I / III型胶原蛋白的比例，使其类似于年轻，健康的皮肤组织。Adsc衍生的外泌体可以通过通过成纤维细胞促进胶原蛋白分泌来修复皮肤组织[15.那16.］．MMPs是一种含锌的蛋白酶，通过降解细胞外基质引起组织损伤，从而导致皱纹的形成[17.］．过量的紫外线辐射可以通过角质形成细胞，成纤维细胞和炎性细胞增加MMP分泌物，等等[18.］．紫外线照射可诱导MMP-1、MMP-3和MMP-9的分泌。与皮肤质量密切相关的I型胶原，MMP-1引发胶原纤维的破坏，MMP-3进一步降解胶原。真皮组织中MMP-3含量直接影响胶原降解效率。我们观察到皮下注射adsc来源的外泌体有效地降低了真皮组织中MMP-3 mRNA的相对表达，这可能是由于胶原降解率降低，纠正了胶原合成与降解之间的失衡，从而增加了胶原含量，改善了皮肤老化。

皮肤的修复和再生需要各种组织和细胞之间的协同作用来替代、修复和重建细胞结构和组织层中的缺陷。外泌体是影响促进皮肤修复和再生的多个过程和细胞的重要因素，如促进成纤维细胞增殖和迁移，促进血管生成，调节损伤的局部炎症反应，促进伤口愈合早期阶段的胶原合成，以提高修复速度，并在后期抑制胶原蛋白的合成以抑制疤痕组织的形成。

近年来，越来越多的研究聚焦于皮肤光老化的研究和治疗，包括对干细胞应用的研究。其他研究证实ADSCs可通过旁分泌和自分泌作用促进成纤维细胞增殖、分泌和迁移。此外，干细胞还能促进血管生成，参与受损皮肤组织的修复和结构重建。既往研究也提示ADSCs可通过抗氧化作用和成纤维细胞活化等途径促进胶原分泌等途径改善皮肤老化。外泌体是调节干细胞分泌和旁分泌的重要细胞结构。最近对血管重构进行了大量的研究。研究还表明外泌体可以诱导巨噬细胞极化并促进伤口修复。这是通过干细胞来源的外泌体中包含的microrna发生的，它可以调节细胞增殖和分化，促进伤口愈合。外泌体对光老化皮肤的影响知之甚少。因此，我们在SD大鼠模型中使用UVB诱导皮肤光老化，然后皮下注射外泌体进行皮肤光老化治疗，观察外泌体对皮肤光老化的影响。

5。结论

总之，我们的研究证实了基于皮肤和表皮厚度和结构的变化，皮肤胶粘剂，MMP-1和MMP的相对mRNA表达，从表皮遗传，组织学和mRNA表达观点来改善患有肌肤光学或MRNA表达视角的ADSC衍生的外来体的潜力。3，以及地层基质细胞中核的增殖能力，为临床应用提供了临床应用的理论依据，用于治疗皮肤肌肤。

数据可用性

用于支持本研究结果的研究文章数据包括在文章中。

的利益冲突

所有提交人宣布没有关于本文的出版物的利益冲突。

作者的贡献

君西梁和轩廖同等为这项工作贡献。

致谢

本工作得到了中国天然科学基金（81372065和81871563），广州科技局的主要项目（201300000091和201508020253），以及中央大学的基本研究资金（21619350）。

补充材料

统计学分析表明，在Adsc衍生的外腔治疗组中，增殖基底层中的核数小于治疗后28天对照组中的核数量（ )．它表明ADSC衍生的外腔体处理减少了增殖状态的基础层中的核数。（补充材料）

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