成人b细胞急性淋巴细胞白血病患者CD25/CD123共表达的临床影响

抽象的

本研究旨在确定CD25的临床影响⁺/ CD123.⁺成人b细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)的共表达。120例初诊B-ALL患者(≤60岁)纳入本研究。采用流式细胞术检测白血病母细胞中CD123和CD25的表达。CD25⁺/ CD123.⁺40/120 B-all患者（33.3％）检测到共表达。所有b-all患者显示CD25⁺/ CD123.⁺与B-B-B的所有案例相比，共表达患缓解响应诱导和较短的整体存活率。总之，CD25⁺/ CD123.⁺共表达阳性是预测成人B-ALL患者预后的可靠的流式细胞术标志物，可作为成人B-ALL患者风险分层的新参数。

1.介绍

急性淋巴细胞白血病（全部）是一种肿瘤疾病，其特征，其特征在于骨髓（BM），淋巴结，胸腺或脾脏中白血病细胞的克隆膨胀。它是一种异质疾病，其特征在于多个亚型[1］．

成人B-ALL患者的治疗策略是基于各种预后因素，包括患者的年龄和表现状态，以及白血病克隆的细胞遗传学和分子特征[2- - - - - -5］．

费城正(Ph值⁺B-ALL在儿童中占3-5%，在成人中占20-30%，在>50岁的患者中发病率增加到约50%。Ph患者⁺和博士⁺在使用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)联合常规化疗进行靶向治疗之前，类分子和细胞遗传学特征经常与不良预后相关，这极大地改善了这一先前预后不良组的结果[6］．并非所有B-ALL病例中都存在细胞遗传学和分子异常[7］．

目前的研究重点是检测能够预测B-ALL患者预后的新型预后标志物。一些研究报道了B-ALL患者白血病相关标志物与细胞遗传学结果和临床结局的相关性。这包括分化簇(CD)-25 (CD25)和白细胞介素-3受体α链(IL-3R)α.（CD123））[6，8，9］．

CD25代表了α.-Chain的白细胞介素-2受体（IL-2Rα.)，是一种低亲和力的结合受体。IL-2受体由三个亚基(α、β和γ链)的不同组合组成，通常在活化的t细胞上表达。IL-2受体结合其配体IL-2后，诱导t细胞增殖和分化[10］．通过流式细胞术（Fc）的CD25的表达被描述为差的预后因子差，并且建议是鉴定pH值的患者的患者的患者的贫困因子⁺谁将受益于基于tki的化疗[6，10］．

CD123在几种血液肿瘤中表达，包括b细胞ALL，但在正常造血干细胞中表达水平较低或缺失[8］．重要的是，已有报道在白血病干细胞和分化程度更高的白血病母细胞中检测到cd123阳性表达[9，11］．

本研究旨在评估CD25 / CD123表达的模式及其在成人B-患者中的临床价值。

2.方法

120例治疗前≤60岁的新诊断成人B-ALL患者纳入本研究。所有纳入的患者均给予知情同意。B-ALL患者诊断时采集骨髓和/或外周血样本。对患者进行外周血涂片和骨髓涂片形态学检查(原始细胞≥20%)。免疫表型评估使用以下单克隆抗体(MoAbs)组合用于急性白血病诊断和识别B-ALL亚型:CD34。PE(克隆8g12 bd)， tdt。PE(克隆E17-1519 BD)，抗mpo。Fitc(克隆clb-mpo-1 bc)， cd45。APC(克隆h130bd)， CD79a。PE(克隆hm47bd)， cd20。Fitc(克隆b9e9bc)， cd10。PE(克隆H110a BD)， CD19。克隆j3-119 bc)， cd22。PC 5.5(克隆SJ10。1 h11 BC), CD7。PE(克隆m-t701 bd)， cd2。FITC(克隆RPA-2。 10 BC), CD3.PC 5.5 dye (clone UCHT1 BC), CD117.PE (clone 104D2D1 BC), CD33.PE (CLONE WM53BD BD), CD13.PE (CLONE WM15 BD), CD14.PE (clone M5E2 BD), and CD64.FITC (CLONE MA-251 BD PHARMAGEN). All antibodies were purchased from BD Biosciences and Beckman Coulter (BC). Samples were analyzed on a BD FACS Canto™ flow cytometer. Autofluorescence, viability, and isotype controls were included. Flow cytometric data acquisition and analysis were conducted by BD Cell Quest™ Pro software.

使用鱼类技术进行细胞遗传学评估，用于检测费城染色体（BCR / Abl融合基因）。患者随访24个月或直至死亡。该研究已获得Mansoura医学院当地伦理委员会的批准，并符合赫尔辛基宣言的规定。

2.1。流式细胞仪CD25 / CD123细胞抗原表达的测定

CD25和CD123分析采用染色/裂解/洗涤技术。简单地说，在单管中，10μ.L CD25-PE莫阿布（克隆MA-251 BD Pharmagen），10 μ.l的CD123-FITC MoAb(克隆7G3 BD PHARMAGEN)μ.L中加入CD45 APC（克隆H130 BD Pharmagen）加入100 μ.取乙二胺四乙酸(EDTA)新鲜骨髓样品，混合均匀，室温孵育15分钟。然后用磷酸盐缓冲盐水(PBS)冲洗细胞两次;加入溶解液2 ml，混合后避光静置15分钟，PBS冲洗2次。最后一次洗涤后，细胞被悬浮在500μ.流式细胞仪(FACSCanto flow cytometer with CellQuest software;正欲)[12］．测量至少10,000个事件/管。

基于CD45暗淡表达和侧散散射特性来定义BLAST门，并计算为总门控事件的百分比。对于CD123表达的分析，测量包括白血爆炸上的平均荧光强度（MFI）（使用负面内部对照调整背景荧光）和相对平均荧光强度（RFI）比（除以非血症事件的定义白血病爆炸的MFI值）。在患者的样品中，如果使用MFI的≥20％的白血病爆炸，则定义CD25或CD123，其中使用MFI超过阴性对照中的背景荧光（非血症门控事件）[13］．

2.2。统计分析

通过使用Fisher精确测试，如果它们是分类（定性数据，百分比）和Wilcoxon等级测试，则患者数据进行比较，如果它们是连续的（定量数据，则为平均值±SD）。

总生存期(OS)定义为从随机分组到任何原因死亡的时间。采用Kaplan-Meier法估计OS概率，采用log-rank检验评估相关性的统计学意义。

抗原表达数据用观察值的描述性统计来描述。将表达CD25/CD123抗原的原始细胞百分比视为连续变量，并与非参数Wilcoxon秩和检验进行比较。

3.结果

B-all病例中CD25和CD123表达的模式呈现在表中1．在截止值≥20％时考虑阳性表达。B-all患者显示CD25的患者⁺/ CD123.⁺表达被分类为第1组，而那些表达单阳性表达的人（CD25⁺/ CD123.⁻或CD25⁻/ CD123.⁺)和双阴性表达(CD25⁻/ CD123.⁻)组为第2组。CD25⁺/ CD123.⁺40/120例(33.3%)B-ALL患者共表达。阳性(CD25⁺/ C123⁻和CD25⁻/ CD123.⁺)表达率分别为25/120(20.8%)和20/120(16.7%)。双重否定(CD25⁻/ CD123.⁻)在25/120例(20.8%)B-ALL中表达。

CD25/CD123表达模式对B-ALL患者特征的影响见表2．将表达模式分为两组。组1包括CD25⁺/ CD123.⁺2组为CD25阳性⁻/ CD123.⁻+ CD25⁺CD123⁻和CD25^-/ CD123.⁺表达。第1组（CD25⁺/ CD123.⁺)的中枢神经系统浸润和淋巴结病变发生率较高，诱导缓解反应率较低，Ph值较高⁺，但血清LDH浓度较2组(CD25/CD123单阳性、双阴性)低(= = 0.01;0.05;< 0.001;分别为< 0.01)。其余参数在两组中无显著差异( ）.

在120名B-ALL患者中，有36人(30%)的费城染色体被检测出阳性。大多数B-ALL患者(36/40;90%)显示CD25⁺/ CD123.⁺共表达费城染色体阳性(表3.）.

CD25 / CD123表达对B-all患者的整体存活（OS）的影响显示成人B-所有患者显示CD25的患者⁺/ CD123.⁺共表达(双阳性)与阴性(单阳性和双阴性)相比，OS明显缩短(表4）.使用Kaplan-Meier曲线进行的生存分析研究显示，显示CD25的B-ALL患者⁺/ CD123.⁺共表达比阴性表达的OS更短( ）(图1）.

4。讨论

近年来，新兴的研究发现CD123和CD25在各种白血病爆炸细胞的表面上高度表达，并且可能有助于白血病细胞的增殖优势。作为一种新型生物学标志物，它在诊断，靶向治疗和许多疾病预后评估具有吸引人的前景[14］．

在目前的研究中，CD25⁺/ CD123.⁺在33.3％（120个中）的调查B-all患者中检测到共表达。据我们所知，之前没有报告过CD25⁺/ CD123.⁺在这样的患者队列中共表达。

在53.8％（双阳性基团中33.3％的33.3％，在单阳性组中检测到CD25 +表达）。该数字高于Nakase等人检测到的数字。[10[25%]， Jaso等人[15[30%]， Owaidah等人[16)(32%)。这种差异可能是由于以往研究中证实CD25+表达的截断值较高(30%)。

CD123⁺50%的研究B-ALL患者(33.3%为CD25双阳性)有表达⁺/ CD123.⁺+ 16.7%的单阳性CD25⁻/ CD123.⁺组)。这一数字低于Angelova等人的报告[8) (164/183 (89.6%));Djokic等[17]检测到31％的强烈表达，61％中等表达，8％阴性，和Bras等人。[18检测到CD123⁺所有病例中85%的b细胞前体(BCP)表达(224/262)。这些争议可以用CD123检测的截止值的差异来解释⁺在不同研究中的表达。

在目前的研究中，博士⁺在30%(36/120)的B-ALL病例中发现。这一发现与Gadhia等人的报告几乎相似[19]（33.3％）和高于Obadiah等人报告的高。[16)(17.5%(18/103))。

在本研究中，缺乏CD25的患者中，血清LDH水平的中位LDH水平显着高。⁺/ CD123.⁺与那些显示CD25的人相比，共表达⁺或CD123⁺单一表达。这一发现可以根据B-缺乏CD25的所有患者组进行解释⁺/ CD123.⁺与CD25相比，共表达具有更高的中位数爆炸细胞计数⁺/ CD123.⁺积极的共同表达。先前的报告指出，血清LDH的增加值直接反映了所有[患者患者的肿瘤肿块20.］．

为了评估CD25的预后相关性⁺/ CD123.⁺共表达，我们已经将这种表达与一个众所周知的预后因子，即费城染色体相关联。我们发现CD25之间有很强的相关性⁺/ CD123.⁺阳性共表达和Ph⁺耐心 （ ）.所有Ph值⁺患者显示CD25⁺/ CD123.⁺coexpression。与我们的发现平行的是，Angelova.et al。8]报道CD123表达在Ph⁺患者比在pH中⁻患者(96.6% vs 86.3%; ）.

BCR / ABL在120（30％）B-所有情况下以36个（30％）。这种发现略高于先前检测到的，这是22％的[10，15］．此外，在之前的两项研究中，他们发现CD25表达与Ph值之间存在关联⁺在成人b-所有情况下。同样，Owaidah等人。[16] Gaikwad等人。[21]发现所有BCR/ abl阳性病例均为表面CD25阳性。此外，Chen等人[6]报道了B-ALL中CD25表达(以15%作为截断值)预测Ph⁺(敏感性80%，特异性86%，阳性预测值37%，阴性预测值97%)。最后，Gönen等人[22]报道了CD25⁺表达是急性髓系白血病患者预后的独立预测因子。

B-所有CD25的患者⁺/ CD123.⁺共表达与阴性表达相比，诱导缓解率较低，总生存率较短。这些结果可以解释的基础上，CD123的过表达定义了一个对化疗有耐药性的原始细胞子集，似乎与高复发率有关[14，23］．

总之，CD25阳性⁺/ CD123.⁺阳性共表达定义了一个预后差的B-ALL患者子集，有助于完善诊断时B-ALL病例的风险分层。

数据可用性

用于支持本研究发现的数据是可用的，并可能在向通讯作者申请后发布。

利益冲突

作者宣布没有利益冲突。

参考

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