ECAM 以证据为基础的补充和替代医学 1741 - 4288 1741 - 427 x Hindawi 10.1155 / 2020/5604654 5604654 研究文章 主要研究抗炎作用和抗炎组件的PSORI-CM02斑马鱼模型 https://orcid.org/0000 - 0003 - 0287 - 752 x 元 萧红 1 2 黄 Leyu 1 Lei 嘉奇 1 长 Yingxin 1 李 琮 1 安杜哈尔 伊莎贝尔 1 广州中医药大学第二附属医院 广州510120 中国 gzucm.edu.cn 2 广东省中国医学科学院 广州510006 中国 2020年 28 5 2020年 2020年 10 12 2019年 31日 03 2020年 18 04 2020年 28 5 2020年 2020年 版权©2020北京市元等。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

PSORI-CM01 PSORI-CM02是一种优化公式,是一种治疗银屑病的临床配方广东省中医医院。先前的研究表明,它在抗炎和免疫调节中起着至关重要的作用。根状茎smilacis glabrae(显示)是PSORI-CM02草药之一,有效的抗炎组件是astilbin。本研究旨在测试astilbin的抗炎和免疫调节作用,以及显示在PSORI-CM02,我们分别使用了CuSO4全身neutrophil-specific转基因斑马鱼模型 Tg (mpx EGFP):和黑色素等位基因突变白化菌株斑马鱼模型可视化招募中性粒细胞和巨噬细胞吞噬作用的影响。我们的数据表明,PSORI-CM02和astilbin有抗炎作用,导致招募中性粒细胞减少和促进巨噬细胞的吞噬作用。然而,根状茎的负面酒smilacis glabrae (PSORI-CM02没有显示)也有抗炎和促进巨噬细胞吞噬作用的影响。结果显示除显示的公式也有抗炎和免疫调节作用,这表明,显示没有PSORI-CM02中的主要抗炎草药。同样,astilbin不是主要的抗炎活性成分的公式。抗炎和促进巨噬细胞的吞噬作用PSORI-CM02的效果 在活的有机体内斑马鱼是多个组件交互的结果,这是中药化合物的共同特征。

 广东省自然基金项目 2017年a030313733 广东省科学技术厅 2016年a020215195 1。介绍

炎症反应是一个复杂的生理和病理生理的级联反应,感染和损伤。炎症机制也与许多疾病,包括心血管疾病密切相关,风湿性关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默病,甚至癌症( 1, 2]。炎症过程是由多种炎症细胞,包括中性粒细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和单核吞噬细胞( 3]。在炎症条件下,血液中的中性粒细胞迁移对伤害网站( 4]。同时,巨噬细胞是主要的免疫细胞的先天免疫系统和炎症中发挥重要作用,直接抵消有害的外部刺激。激活巨噬细胞在宿主防御感染病原体扮演着重要角色,开始吞噬活动,促进炎症反应通过生产各种炎症介质( 5- - - - - - 7]。吞噬作用的病原体,凋亡细胞,巨噬细胞碎片是一个关键的特征函数在宿主防御和组织内稳态 8]。因此,监测动物的中性粒细胞数量和检测巨噬细胞吞噬作用是有效的方法来评估炎症反应。许多疾病的发生和发展相关免疫和炎症。因此,药物研究与免疫和抗炎作用一直是研究领域的一个热门话题。

斑马鱼是非常类似于哺乳动物的形态和生理、及其胚胎的光学透明度可以无创性和动态成像的炎症 在活的有机体内( 9]。此外,一代的转基因斑马鱼neutrophil-specific绿色荧光蛋白(GFP)表达了观察中性粒细胞行为成为可能 在活的有机体内( 4]。消除反向迁移以及细胞凋亡的中性粒细胞和巨噬细胞摄取也被观察到在炎症的过程中解决( 10, 11]。巨噬细胞不仅参与组织重塑过程中去除细胞碎片的产生,但也及时和有效地清除细胞经历了细胞凋亡。巨噬细胞的主要作用是清除外来细胞的间质环境材料( 12]。因此,在第二个实验中,黑色素等位基因突变斑马鱼白化菌株被注入墨水静脉注射观察巨噬细胞吞噬作用,使药物对巨噬细胞吞噬作用的影响可以被评估。最后,药物的抗炎作用进行评估,这两个斑马鱼模型。

中药化合物是中医临床应用的主要形式,通常由多个类型的中国草药,发挥药效的作用在人类的身体通过相互协调或限制( 13]。PSORI-CM01 PSORI-CM02是一种优化公式,全国著名的经典处方医生郭威宣,已用于牛皮癣寻常的二十多年来在广东省医院( 14]。PSORI-CM02由根茎curcumae、赤芍、 Sarcandra glabra,根状茎smilacis glabrae, 果实却已,这是证明有抗炎作用,提高免疫力 15]。显示,这是一个中国传统医学在PSORI-CM02,据报道有抗炎作用,其主要有效活性成分是astilbin [ 16]。PSORI-CM02还具有抗炎活动;然而,主要的抗炎成分仍不清楚。在这里,我们试图澄清是否显示是主要的中药抗炎作用和astilbin PSORI-CM02抗炎的主要活性成分。为此,两种病理模型的建立了斑马鱼:铜sulfate-induced斑马鱼炎症模型和斑马鱼巨噬细胞吞噬功能评价模型。此外,相关药效学实验评价抗炎效应和astilbin之间相关性,显示,PSORI-CM02。

 2。材料和方法 2.1。材料 2.1.1。仪器和试剂

Six-well板(巢生物技术,中国);解剖显微镜(SZX7、奥林巴斯、日本);相机在解剖显微镜(VertA1,中国);精密电子天平(CP214,排开,美国);电气集中连续变焦荧光显微镜(AZ100、尼康、日本);甲基纤维素(σ,中国);二甲亚砜(DMSO)(σ,中国);中性红(σ,中国)。

 2.1.2。实验动物

在这个实验中,两个斑马鱼品系,转基因斑马鱼中性白细胞荧光 Tg (mpx EGFP):和黑色素等位基因突变斑马鱼白化,用于自然交配和繁殖。每个实验组由30斑马鱼,从猎人购买生物技术,Inc .,为期三天的postfertilization斑马鱼(dpf)被用于这项研究。斑马鱼都保持在28°C在水中鱼(海洋盐在每升200毫克的即时反渗透水,pH值6.9 - -7.2,导电率480 - 510 μS /厘米,硬度:53.7 - -71.6 mg / L CaCO314岁以下)h / 10 h光/暗周期)。实验动物的牌照号码是SYXK(浙江)2012 - 0171。所有实验进行按照国际AAALAC认证的要求。

 2.2。准备试验药物 2.2.1。提取PSORI-CM02酒

根据处方,中药提取三次用8倍水浸泡30分钟后,第一次1小时45分钟的第二和第三次;然后通过纱布过滤,再加上三次提取液,最后集中到提取。20毫克/毫升母液制备10% DMSO溶液在使用。这药物是一个含有astilbin: 3.9216毫克/克。

 2.2.2。显示负酒(PSORI-CM02消极的酒)

相同的操作中提到的部分 2.2。1,但没有显示。20毫克/毫升母液制备10% DMSO溶液在使用。这是药物B。

 2.2.3。Astilbin解决方案

Astilbin称重和使用准备20毫克/毫升母液和DMSO之前使用它。这是药物C。

 2.3。建立斑马鱼炎症模型

为期三天的postfertilization斑马鱼(3 dpf)孵化six-well盘子和处理10 μM CuSO42小时28°C,利用先进的图像处理和图像分析软件计算中性粒细胞的数量( n炎症的斑马鱼)。模型对照组之间比较数量(28)和正常对照组(6),表明铜sulfate-induced成功建立了斑马鱼炎症模型( p < 0.05 )。

 2.4。测定药物的最大允许浓度,B和C的斑马鱼炎症模型

在正式实验之前,实验药物的毒性和最大允许浓度应该调查。毒性药品的A, B, C基于形态学变化和死亡数量的neutrophil-specific转基因斑马鱼 Tg (mpx EGFP):是评估 。

在为期三天的postfertilization (dpf), 510年转基因斑马鱼被随机选择,分为17组和放置在six-well盘子。每个好(实验组)治疗30斑马鱼在孵化器和孵化28°C。测试是由斑马鱼暴露在不同浓度的药物,B和C溶解在水中,分别与3毫升/能力。他们分为空白对照组、模型对照组治疗10 μM CuSO42小时,和药物A, B, C组。每个实验药物在5浓度(药物:250、500、1000、1500年和2000年 μg / mL;药物B: 250、500、1000、1500和2000 μg / mL;药物C: 125、250、500、1000和2000 μg / mL)。经过一个小时的治疗,除了空白对照组,其他组有10 μM CuSO4建立转基因斑马鱼的炎症模型。两个小时后,形态变化,并观察斑马鱼死亡率来确定最大耐受浓度的三种药物neutrophil-specific转基因斑马鱼。

 2.5。评价药物的抗炎作用,B和C使用斑马鱼炎症模型

360斑马鱼被随机分成12组,每组30斑马鱼:空白对照组、模型对照组暴露于10 μM CuSO42 h,阳性对照组(80 μM indometacin),和其他药物实验群体。斑马鱼是孵化在six-well盘子28°C孵化器,3毫升/容量的。随后,根据执行的操作是那些小节中提到的 2。4。剂量的药物浓度是222年,667年和2000年 μg / mL和药物B和C是111年,333年和1000年 μ克/毫升。管理两个小时后,10斑马鱼从每组随机选择和连续变焦荧光显微镜下拍摄电动聚焦。药物的抗炎活动A、B和C CuSO4全身炎症斑马鱼进行评估的统计分析中性粒细胞的数量。炎症的比率回归效应计算基于中性粒细胞的数量。给出的计算公式如下: (1) 炎症回归 % = N 模型对照组 − N 测试组 N 模型对照组 × One hundred. % 。

2.6。建立斑马鱼巨噬细胞功能评价模型

实验用斑马鱼进行巨噬细胞吞噬作用评价模型。墨水使用静脉注射3 dpf黑色素等位基因突变斑马鱼白化菌株28°C孵化器孵化48小时,然后是斑马鱼被解剖显微镜观察和拍照。的巨噬细胞吞噬墨水被先进的图像处理软件分析和计算评价样本的影响。

 2.7。最大允许浓度的测定(MTC)的药物,B和C的斑马鱼巨噬细胞吞噬作用模型

在为期三天的postfertilization (3 dpf), 510黑色素等位基因突变斑马鱼白化菌株被随机分成17组相同的方式给出了部分 2。4。他们被安置在6-well板块3毫升/能力。每个好(每个浓度组)由30斑马鱼注入墨水静脉注射建立的巨噬细胞吞噬作用模型。斑马鱼有不同浓度的水溶性药物,B和C,分别(药物浓度:250、500、1000、1500年和2000年 μg / mL;B药物浓度:250、500、1000、1500和2000 μg / mL;药物浓度C: 62.5, 125、250、500和1000 μg / mL)。同时,正常对照组和模型对照组也成立。正常对照组的水处理系统,而模型组只有注入墨水没有给予药物静脉注射。形态变化和死亡率的斑马鱼被用解剖显微镜观察到在一个孵化器孵化后48小时的28°C。随后,这三种药物的毒性的吞噬功能模型分析来确定药物的矿渣MTC, B和C的黑色素等位基因突变斑马鱼。

 2.8。影响药物的A, B, C在斑马鱼巨噬细胞的吞噬功能

在360 3 dpf,黑色素等位基因突变斑马鱼被随机选择和转移到six-well盘子。建立巨噬细胞吞噬功能模型,30斑马鱼在每个(每个浓度组)静脉注射墨水。根据矿渣MTC实验的结果,药物的浓度是56岁,167年和500年 μB g / mL,药物的浓度是56岁,167年和500年 μg / mL,药物的浓度C 111、333和1000 μg / mL,和积极的浓度控制药物拯救胶囊是15.6 μ克/毫升。同时,正常对照组和模型组。每个井3毫升的能力。24小时后的孵化器孵化28°C(即。4 dpf) 3 dpf,斑马鱼是染色的 在活的有机体内中性红溶液。染色后,10斑马鱼被随机选择从每组观察,在显微镜下照片,并保存照片。尼康NIS-Elements D意味着3.10先进的图像处理软件被用来统计分析斑马鱼与吞下墨水。巨噬细胞的数目(N)在斑马鱼被意味着±SE表示,和样品对巨噬细胞的吞噬功能的影响在斑马鱼评估统计学意义。的公式计算测试样本的影响斑马鱼巨噬细胞的吞噬作用如下: (2) 增强巨噬细胞的吞噬作用 % = N 测试组 − N 模型对照组 N 模型对照组 × One hundred. % 。

2.9。统计分析

所有数据都表现为平均值±标准错误(SE)。组之间的显著差异使用Dunnett的决定 t以及和方差分析。的值 p < 0.05 是公认的统计学意义。

 3所示。结果 3.1。MTC的药物、B和C的斑马鱼炎症模型

之前测试药物的抗炎活性,B, C,实验药物的毒理学评价。两个小时后,死亡的数量和斑马鱼毒性观察和记录来评估药物的毒性,B和C,确定最大剂量浓度(MTC)。结果表明,斑马鱼是没有死在以下药物浓度范围(250 - 2000 μg / mL;B: 250 - 2000 μg / mL;C: 125 - 2000 μg / mL)(表 1)。然而,在剂量的1500年和2000年 μ药物B的g / mL,斑马鱼是刺激不敏感,和他们的毒性反应更严重比模型对照组。因此,药物的最大剂量浓度B是1000 μ克/毫升。当药物浓度C 1500年和2000年 μg / mL,药物发生沉淀,所以药物的最大剂量浓度C是设定在1000年 μ克/毫升。根据实验结果,以下浓度的药物,药物:222年、667年和1000年 μg / mL;药物B: 111年、333年和1000年 μg / mL;药物C: 111年、333年和1000年 μg / mL,被选为后续实验。

“Concentration-mortality”测试结果样例治疗后( n= 30)。

组 浓度( μg / mL) 的死亡人数 死亡率(%) 毒性反应
空白对照组 - - - - - - 0/30 0 没有异常
模型对照组 - - - - - - 0/30 0 没有异常
一个 250年 0/30 0 没有异常
500年 0/30 0 没有异常
1000年 0/30 0 没有异常
1500年 0/30 0 没有异常
2000年 0/30 0 没有异常
B 250年 0/30 0 没有异常
500年 0/30 0 没有异常
1000年 0/30 0 没有异常
1500年 0/30 0 不刺激,较模型对照组更严重
2000年 0/30 0 不刺激,较模型对照组更严重
C 125年 0/30 0 没有异常
250年 0/30 0 没有异常
500年 0/30 0 没有异常
1000年 0/30 0 没有异常
2000年 0/30 0 没有异常
3.2。评价药物的抗炎作用A、B和C的斑马鱼炎症模型

硫酸铜可以诱发听觉细胞损伤,导致炎症反应,中性粒细胞积聚的炎症,从而建立一个炎症细胞模型。在这个实验中,斑马鱼CuSO4-induced炎症模型被用来评估三种药物的抗炎作用。如图 1的网站,许多荧光中性粒细胞招募CuSO4-induced斑马鱼的炎症。荧光的平均数量的中性粒细胞炎症的CuSO4-induced斑马鱼模型28±1,而CuSO4-induced幼鱼处理222年,667年和2000年 μ克/毫升的药物是10±1、17±1,分别为15±1(表 2)。同样,斑马鱼的平均荧光的中性粒细胞炎症网站处理111年,333年和1000年 μg / mL药物B 10±1, 10±1,和17±1,分别和治疗的数量与111年,333年和1000年 μg / mL药物C 13±1, 11±1和7±1。炎症回归的速度表 2。实验结果(图 2和图 3)表明,三种药物A、B和C都有不同程度的抗炎活动,和药物的抗炎效应在低浓度比A和B,在高浓度和优于阳性对照药物。药物C的抗炎效果也优于阳性对照药物剂量依赖性模式。

表型的地图每个实验组在斑马鱼炎症的影响。荧光显微镜是用来显示中性粒细胞 Tg (mpx EGFP):幼虫。箭头地区中性粒细胞的数量统计。

实验小组对斑马鱼炎症的影响( n= 30)。

组 浓度( μg / mL) 中性粒细胞的数量(意味着+ SE) 炎症沉降(%)
空白对照组 - - - - - - 6±1 - - - - - -
模型对照组 - - - - - - 28±1 - - - - - -
阳性对照组 80年 μ米 16±1 ∗∗∗ 42.9 ∗∗∗
一个 222年 10±1 ∗∗∗ 64.3 ∗∗∗
667年 17±1 ∗∗∗ 39.3 ∗∗∗
2000年 15±1 ∗∗∗ 46.4 ∗∗∗
B 111年 10±1 ∗∗∗ 64.3 ∗∗∗
333年 10±1∗∗∗ 64.3 ∗∗∗
1000年 17±1 ∗∗∗ 39.3 ∗∗∗
C 111年 13±1 ∗∗∗ 53.6 ∗∗∗
333年 11±1 ∗∗∗ 60.7 ∗∗∗
1000年 7±1 ∗∗∗ 75.0 ∗∗∗

与模型对照组相比: ∗ ∗ ∗ p < 0.001 。

实验小组对斑马鱼的影响炎症(中性粒细胞的数量)。CuSO后发现了中性粒细胞炎症部位4治疗2 h。中性粒细胞的数量计算的炎症。 N= 10,模型对照组比较: ∗ ∗ ∗ p < 0.001 。

每个实验组递减效应的炎症。所有斑马鱼幼体孵化在six-well盘子,和每个好是3毫升的能力。除了空白对照组,给药物水溶液,B和C和indometacin一小时。中性粒细胞被发现在治疗后2 h 10 μM CuSO4所示。积极的控制处理80 μM indometacin。PSORI-CM02使用浓度的222年,667年和2000年 μ克/毫升。B: PSORI-CM02 -药物浓度在111年,333年和1000年 μ克/毫升。C: astilbin浓度在111年,333年和1000年 μ克/毫升。中性粒细胞的数量统计和统计分析。炎症的比率回归效应计算基于中性粒细胞的数量。 N= 10, ∗ ∗ ∗ p < 0.001 。

 3.3。MTC的药物、B和C的斑马鱼巨噬细胞吞噬作用模型

下表 3,斑马鱼对待250年和500年 μA和B g / mL的药物没有明显的不良表型。1000年的死亡率的药物浓度,1500和2000 μg / mL为23.3%,46.7%,和96.7%,分别。在250年和500年 μ药物B, g / mL斑马鱼没有死。此外,死亡率是70%,100%,1000年100%,1500年和2000年 μg / mL,分别,所以矿渣MTC的药物的浓度和药物B是500年 μ克/毫升。此外,-1000年剂量的62.5 μC g / mL的药物没有造成任何毒性作用在斑马鱼的发育阶段,但当溶解药物的浓度C是超过1000 ug /毫升,沉淀,所以最大剂量的药物是在1000年 μ克/毫升。

“concentration-mortality”测试的结果样例(治疗后 n= 30)。

组 浓度( μg / mL) 的死亡人数 死亡率(%)
空白对照组 - - - - - - 0/30 0
模型对照组 - - - - - - 0/30 0
一个 250年 0/30 0
500年 0/30 0
1000年 7/30 23.3
1500年 14/30 46.7
2000年 29/30 96.7
B 250年 0/30 0
500年 0/30 0
1000年 21/30 70.0
1500年 30/30 One hundred.
2000年 30/30 One hundred.
C 62.5 0/30 0
125年 0/30 0
250年 0/30 0
500年 0/30 0
1000年 0/30 0

基于上述实验结果,以下浓度:药物:56岁,167年和500年 μg / mL;药物B: 56岁,167年和500年 μg / mL;药物C: 111年、333年和1000年 μg / mL被选为后续实验。

 3.4。促进斑马鱼巨噬细胞的吞噬作用药物A, B, C

后建立斑马鱼巨噬细胞的吞噬功能模型和给药24小时,观察巨噬细胞通过油墨的数量从上颌斑马鱼的两只耳朵,如图 4。巨噬细胞的数量通过墨水阳性组和低、中、高剂量组的药物A, B, C如图 5和巨噬细胞促进吞噬作用如图 6和表 4。结果表明,三种药物A, B和C都促进了巨噬细胞的吞噬作用在实验浓度。药物在斑马鱼巨噬细胞的吞噬作用促进效应与剂量呈正相关。药物的影响B和C是最好的药物在中剂量,而药物的效果在高浓度组和药物C在中浓度组优于阳性对照组。药物的影响B在中浓度组类似于阳性对照组。

表现型斑马鱼墨水被巨噬细胞吞噬作用的大脑。统计区黑色虚线框。白色箭头指示的巨噬细胞吞噬了墨水。因为它吞下了墨水,巨噬细胞的颜色的颜色比正常的巨噬细胞。

的巨噬细胞吞噬墨水在每个实验组斑马鱼的大脑。斑马鱼鱼仔除了空白对照组都注入墨水。积极的控制被注射拯救胶囊解决方案(15.6 μg / mL)。答:药物浓度的使用56岁,167年和500年 μ克/毫升。B:药物使用B浓度的56岁,167年和500年 μ克/毫升。C:药物使用C浓度的111,333和1000 μ克/毫升。巨噬细胞吞噬墨水被数的计算和统计分析。促进巨噬细胞吞噬作用的影响的比率计算是基于数量的巨噬细胞吞噬墨水。 N= 10, ∗ p < 0.05 , ∗ ∗ p < 0.01 , ∗ ∗ ∗ p < 0.001 。

促进巨噬细胞吞噬作用的影响在每个实验组炎症。斑马鱼鱼仔除了空白对照组microinjected了墨水。积极的控制被注射同等体积的援助胶囊的解决方案。答:药物浓度的使用56岁,167年和500年 μ克/毫升。B:药物使用B浓度的56岁,167年和500年 μ克/毫升。C:药物使用C浓度的111,333和1000 μ克/毫升。巨噬细胞的吞噬作用是孵化24小时后观察,和巨噬细胞的数量(N),吞下墨水在斑马鱼统计。促进巨噬细胞吞噬作用的影响的比率计算是基于数量的巨噬细胞吞噬墨水。 N= 10, ∗ p < 0.05 , ∗ ∗ p < 0.01 , ∗ ∗ ∗ p < 0.001 。

主要数据的数量巨噬细胞吞噬墨水在斑马鱼的每个实验组( n= 30)。

组 浓度( μg / mL) 巨噬细胞吞噬墨水(意味着+ SE) 促进巨噬细胞的吞噬作用(%)
空白对照组 - - - - - - - - - - - - - - - - - -
模型对照组 - - - - - - 18±1 - - - - - -
阳性对照组 15.6 24±1 ∗∗∗ 33.3 ∗∗∗
一个 56 22±1 ∗ 22.2 ∗
167年 23±1 ∗∗ 27.8 ∗∗
500年 26±1 ∗∗∗ 44.4 ∗∗∗
B 56 19±1 5.6
167年 24±1 ∗∗ 33.3 ∗∗
500年 23±2 ∗ 27.8 ∗
C 111年 20±2 11.1
333年 26±1 ∗∗∗ 44.4 ∗∗∗
1000年 23±1 ∗ 27.8 ∗

与模型对照组相比, ∗ p < 0.05 , ∗ ∗ p < 0.01 , ∗ ∗ ∗ p < 0.001 。

 4所示。讨论

“多组分、多通道、多目标”是中医的特色和优势的复合治疗疾病( 17]。功效的中药化合物通常是多个组件的协同作用的结果,这也反映在这个实验的结果。PSORI-CM02草药配方是一个代表我们医院的牛皮癣。许多临床和实验研究进行了早期的阶段,和抗炎研究的结果表明,PSORI-CM02可以抑制促炎细胞因子如TNF的mRNA的表达 α、il - 6和IL-17和降低血清中蛋白质含量 18]。PSORI-CM02显示是一种中药,据报道有抗炎活动,及其主要生物活性成分是astilbin [ 16, 19]。探索之间的关系显示,PSORI-CM02抗炎效果,我们进行了这个实验。

先天免疫系统的炎症是一种生理反应,其目的是为了减少致病因素导致组织损伤和/或减少外部影响,产生适当的伤口愈合,恢复组织内稳态( 20.]。炎症反应开始,中性粒细胞和淋巴细胞就被招募阶段,其次是巨噬细胞激活在后期强烈( 1]。然而,如果身体无法解决急性炎症反应,它会发展为慢性炎症的持续 21]。据报道,中性粒细胞参与适应性免疫反应来解决慢性炎症也有牵连的参与单核细胞/巨噬细胞在急性炎症反应 22]。为了应对炎症,必须有效地清除中性粒细胞通过巨噬细胞发生凋亡吞没或离开炎症区域通过反向迁移( 23- - - - - - 25]。

在中性粒细胞实验中,中性粒细胞受损的硫酸铜能发出荧光斑马鱼的听觉细胞,引起炎症反应。中性粒细胞的数量炎症站点(斑马鱼的横向位置,即。斑马鱼的听觉细胞附近)计算。在油墨的巨噬细胞吞噬实验中,巨噬细胞和中性红染色和巨噬细胞的数量在斑马鱼的负责人。这两个实验都是在显微镜下操作。操作简单,实验结果是直观的。的中性粒细胞和巨噬细胞吞噬墨水炎症站点可以获得准确。因此,调查的中性粒细胞炎症网站和巨噬细胞吞噬作用可以作为有效的方法评价药物的抗炎活性。

近年来,作为模式生物,斑马鱼有很多优势,如透明的胚胎,体积小,方便喂食,快速发展,同时和直接观察药物在多种组织和器官的影响,和小样本用量。被广泛应用于毒性和药效学研究[ 26]。利用斑马鱼胚胎的透明特性,炎症细胞的行为可以通过显微镜观察到的和药物的抗炎效果可以调查。在目前的实验中,CuSO4被用来产生听觉细胞损伤在斑马鱼建立炎症模型。实验结果表明,药物A、B和C可能抑制中性粒细胞炎症网站的聚合。药物的抗炎效应,A和B在低剂量更好,这两种药物的抗炎效果是平等的,而药物的抗炎效应在高剂量C是更好的。药物的推广效果的评估,B和C巨噬细胞的吞噬作用表明,药物A, B和C都有促进对巨噬细胞吞噬功能的影响。

我们的结果表明,PSORI-CM02抗炎活动即使没有显示,及其抗炎活性相当。的抗炎活性astilbin(药物C)与剂量呈正相关,而炎症沉降111 ug /毫升只有53.6%,低于64.3%的低浓度药物(0.8706包含astilbin ug /毫升)。即使没有显示,PSORI-CM02仍有相同的抗炎效应,这表明astilbin有抗炎作用,但它不是在PSORI-CM02的主要有效成分抗炎效果。评价实验的巨噬细胞吞噬功能,促进作用的药物是药物的比B,但差异不明显。然而,500 ug /毫升药物(astilbin内容1.9608 ug /毫升)有与333 ug /毫升astilbin相同的促进作用。同样,实验也提供了证据表明,astilbin不是PSORI-CM02的主要活性成分,但只有一个的有效成分,反映出协同效应特点的中药多组分化合物。

pre-experiment,最大剂量的药物的测定,对斑马鱼B和C。在抗炎模型中,药物A, B和C都有小的副作用。的最大管理药物的剂量是2000 μg / mL, B和C的药物是在1000年 μ克/毫升。斑马鱼没有不良反应与矿渣MTC的三种药物浓度。巨噬细胞吞噬作用模型,500年 μg / A和B和1000毫升的药物 μ克/毫升的C被选为最大的政府剂量(考虑溶解度因素)。在正式实验,建立了多个浓度组的矿渣MTC浓度范围内的药品安全评价抗炎模型和巨噬细胞吞噬作用模型,分别。

总之,目前的研究是第一个研究的抗炎效果PSORI-CM02和显示之间的相关性和PSORI-CM02 在活的有机体内斑马鱼模型,这一发现表明,PSORI-CM02 PSORI-CM02 -药物,astilbin能够缓解CuSO4neutrophil-specific转基因斑马鱼刺激炎症反应,可以减少中性粒细胞招募到损伤站点的数量。此外,增加观察巨噬细胞吞噬油墨的数量,也证明了他们可以促进巨噬细胞吞噬作用。Astilbin有抗炎作用,但Astilbin单体的浓度远远高于Astilbin PSORI-CM02中,即使Astilbin(显示)从PSORI-CM02,它几乎没有影响PSORI-CM02的抗炎作用。上述结果表明,其他组件也有抗炎作用的化合物。具体情况需要进一步深入研究。

 数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

 确认

我们应感谢杭州猎人生物技术有限公司有限公司的帮助在这个研究。这项研究是由广东省自然基金项目(2017 a030313733)和广东省科学技术厅基金项目(2016 a020215195)。

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