APS 药理和制药科学的进步 2633 - 4690 2633 - 4682 Hindawi 10.1155 / 2020/3058735 3058735 研究文章 小说Dimethylacetamide-Containing配方提高眼眶下的麻醉效果与牙周炎大鼠 Blinova Ekaterina V。 1 2 Shikh Evgeniia V。 1 Semeleva 埃琳娜V。 2 Yurochkina Aleksandra M。 3 诺维科夫先生 安德烈V。 1 Vediaeva 安娜·P。 1 列别捷夫 Arkadii B。 4 Lobanova 埃琳娜·G。 5 Vasilkina 奥尔加V。 2 3 https://orcid.org/0000 - 0002 - 8385 - 4356 Blinov 德米特里•S。 3 Mazov 燕。 1 Kogan Evgeniia。 1 啦 伊斯梅尔 1 手术手术和临床解剖学 病理学系 牙医学系 Sechenov大学 119991年莫斯科 俄罗斯 sechenov.ru 2 牙医学系 眼科学系 国家研究莫尔多瓦州立大学 萨兰斯克430005 俄罗斯 3 药物化学和药物设计 全科学中心的生物活性化合物 Staraja Kupavna 142450 俄罗斯 4 药理学系 特维尔州医科大学 170100年特维尔 俄罗斯 5 药理学系 人工智能Yevdokimov莫斯科国立大学医学和牙科 119983年莫斯科 俄罗斯 2020年 14 4 2020年 2020年 16 10 2019年 23 12 2019年 20. 02 2020年 14 4 2020年 2020年 版权©2020 Ekaterina诉Blinova et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

背景。评估急性毒性和局部麻醉活性配方包含一个新颖的二甲基乙酰胺衍生物,抗氧化和血管收缩剂在大鼠慢性牙周炎。 方法。小说麻醉dimethylacetamide-containing配方LHT-15-32研究2%水的解决方案。其急性毒性静脉和皮下决心在老鼠身上。疼痛敏感度阈值的确定第二大臼齿在大鼠实验性牙周炎。氧化应激活动和总抗氧化能力测定大鼠诱导化学发光的牙龈粘膜。当地在考试牙周组织的形态学变化进行评估。组织il - 1 β、il - 10和TNF-α浓度定量评估了酶联免疫吸附试验。LHT-15-31 Na-blocking活动孤立的神经元进行了研究 Limnaea stagnalis肿块神经节。分离出坐骨神经的 Rana radibunda与不同浓度的灌注LHT-15-32评估其电导率。使用统计分析,提出了连续变量平均值±平方偏差。使用方差分析的常态分布决定。Newman-Keuls参数准则用于组间比较。LD50索引被概率单位分析计算。 结果。LHT-15-32急性静脉和皮下毒性低于它的活性物质。眼眶下的政府制定的诱导深牙麻醉持续了70分钟,激活当地的抗氧化防御系统和降低il - 1 β在牙龈组织。LHT-15-32引发组织补偿在影响上摩尔老鼠评估五天后管理。10点−6到10−3M浓度,LHT-15-32抑制Na坐骨神经传导性和阻塞+渠道分离神经元剂量依赖性的方式。 结论。制定可能被认为是一个有效且安全的方法使麻醉与牙周炎臼齿。

 俄罗斯政府研究委员会资助 2017 - 14 - n08 - 0036 1。介绍

现代临床实践,尽管显而易见的成功创造了新的局部麻醉药(LA)以及优化技术提供药物的风险敞口,继续经历困难在实现最优,洛杉矶的止痛效果( 1]。最常见的原因之一缺乏LA功效牙科是几乎总是LA患者炎症过程管理领域的牙髓、根尖周的区,牙周、牙槽区域( 1, 2]。

从业者经常经历巨大困难的感应足够深度和持续时间的牙麻醉使用渗透方法与炎症或神经封锁在牙髓炎或根尖牙周炎( 3]。临床研究证明失败在30 - 45%或低成功在19 - 56%的患者炎症过程的臼齿在的下牙槽神经阻滞甚至anaesthesiological福利由一个有经验的临床医生( 4]。无论是浸润麻醉的脸颊和舌头,也不是传统的块神经是伴随着提高操作的效率。因此,现在在牙科问题的足够的麻醉是一个重要的挑战对临床和实验药理学家( 1, 4]。

利多卡因历史悠久的成功作为洛杉矶一直以来第一次管理中间的20倍th世纪( 5]。利多卡因抑制神经传导性Na的可逆的封锁+渠道和稳定细胞膜由于其抗氧化性质。作为单一疗法或结合血管收缩剂,它已经显示出令人满意的麻醉除了在炎症的情况下( 1]。

这项研究的目的是评估急性毒性和LA活动的制定包含一个新颖的二甲基乙酰胺衍生物,抗氧化和血管收缩剂在大鼠慢性牙周炎。

 2。材料和方法 2.1。道德

GLP标准的研究满足所有的需求和欧洲公约保护脊椎动物动物用于实验和其他科学规定。研究协议已经评审并批准Sechenov大学生物伦理学委员会(莫斯科,俄罗斯)7月6日2017(会议7号,注册。不。6/7/2017-11)。

 2.2。药物配方

新配方(实验室代码:LHT-15-32)开发的药物化学和药物设计全科学中心的生物活性化合物(AUSC BAC,俄罗斯)2%水溶液包含N-acetyl-L-glutamine 2-diethylamino-2′, 6′-dimethylphenylacetamide(实验室代码:LHT-4-00 AUSC BAC;化学纯度:99.75%)作为活性物质。解决方案的每毫升含有2毫克的ethyl-methyl-hydroxypyridine苹果酸(EMHPM)和肾上腺素1:200000。药理性质LHT-15-32一直在独自与LHT-4-00相比可溶性蒸馏水 前临时和利多卡因(利多卡因HCI, 20毫克/毫升,20毫升,Hospira Inc .)、美国)。同时参考药物研究了浓度2%。介绍之前,pH值的每个测试解决方案确定和调整7.35与8.4%碳酸氢钠考虑体积和浓度的解决方案。

 2.3。动物和生物对象

五十远系繁殖五白老鼠重18 - 20 g男女15的青蛙( Rana radibunda)从实验动物饲养设施获得俄罗斯科学院(RAS)。六十五Sprague-Dawley雄性老鼠重250 - 300克购买动物饲养设施的理论和实验研究所的生物物理学的RAS(俄罗斯)。动物被保存在无菌条件下和自然日光周期。无菌水和食物 随意,室温(25±2°C)以及湿度(60±10%)维护。小鼠随机分为11组毒理学实验。五十个老鼠被随机分配10动物分成5组:完整的老鼠,控制,利多卡因,LHT-4-00,和主组;15动物被分成三个小组,5大鼠(完好无损、控制和主要组)并受形态学检查。3.5厘米长度蛙的坐骨神经标本分离和保存在一个铃声解30 - 40分钟在22°C的刺激。冷漠孤立肿块神经节的神经元 Limnaea stagnalis。

 2.4。急性毒性试验

LHT-15-32急性静脉注射(IV)毒性评估如前所述的估计平均剂量(LDOne hundred.),导致动物的死亡(迦得,1990)。制定皮下(SC)毒性(LD50)是注册在老鼠指派给一个明确的剂量组14天LHT-15-52注射后如前所述[ 6]。

 2.5。建模的实验性牙周炎

实验性牙周炎是在麻醉诱导前描述(硫喷妥钠,山德士,GmbX,奥地利;40毫克/公斤,(四)男性Sprague-Dawley老鼠分配给所有的群体,除了一个完整的动物通过切断第二上摩尔的丝线(美国Ethicon Inc . 5) 7]。

 2.6。牙麻醉评估

15天,麻醉动物(硫喷妥钠,山德士,GmbX,奥地利;40毫克/公斤,IV)被放在一个加热平台的立体定位系统SR-5R (Narishige有限公司、日本)配备便携式钻机。两个洞直径0.3毫米,3.0 - -3.5毫米深度钻在第二个上摩尔,自由结束的platinum-stimulating电极(美国ADInstruments)与一滴塑料填充固定。电极的另一端通过这个洞在动物的脸颊皮肤枯萎和钱包皮肤缝合固定。四天后,矩形脉冲(100 5 s imp / s)的增加电流强度从0.1到10马(BIOPAC mp - 160, BIOPAC系统公司美国)以应用于牙齿疼痛敏感度阈值(PST)注册的发生动物运动反应和发声。测试解决方案(0.2毫升)管理眼眶下的10分钟后基线PST登记(PST)的零电平。全麻醉提出如果马5因素10刺激没有造成动物反应(100%水平的PST)。

 2.7。局部氧化压力分析

我们使用Fe-induced化学发光评估氧化应激活动(OSA)和总抗氧化能力(TAC)牙龈黏膜组织匀浆的老鼠与硫喷妥钠过量后第二天拉水平测量如前所述[ 8]。

 2.8。酶联免疫吸附试验(ELISA)

il - 1 β、il - 10和TNF-α浓度被发现在老鼠的牙龈组织匀浆通过定量ELISA使用鼠白介素1 β(CSB-E08055r),大鼠白介素10 (csb - 04595 - r),和老鼠TNF-α(csb - 11987 - r) ELISA试剂盒(Cusabio技术、有限责任公司、中国)和StatFax 4200自动读者(美国)。

 2.9。坐骨神经传导测定

坐骨神经标本灌注是一个含氧Tyrode的解决方案(mM:氯化钠、145 0;氯化钾4 0;MgCl21 0;CaCl2,80;三,5。0;葡萄糖,10。0;包含10个pH值7.3 - -7.5)−3,10−4,10−5,或10−6M LHT-15-32浓度在22 - 24°C。创造温和的酸中毒,Tyrode溶液的pH值被HCl调整为6.5 - -6.7。标本被增加的线性脉冲刺激电流强度使用镀金黄铜电极(美国ADInstruments)和BIOPAC mp - 160系统。动作电位(AP)振幅测量和基线的表示为%。

 2.10。Na <一口> + < /一口>通道阻塞活动

我们使用全细胞patch-clump方法访问的配置通过钠离子电流+nondifferentiated神经元的渠道。神经元是透析一个含氧的解决方案(mM:中海,120;Tris-OH 2与pH值7.3 - -7.4)。外膜表面灌注LHT-15-32解决方案(mM:氯化钠,110;MgCl2和Tris-OH 2与pH值7.5)[ 9]。

 2.11。形态学评价

评估当地的形态学变化,影响周围的软组织摩尔老鼠的完整,控制,和主要群体,与硫喷妥钠过量,五天后检查评估。显微镜载玻片由标准程序:组织在10%中性缓冲福尔马林固定和嵌入在石蜡(德国徕卡LP 1020组织处理器)。然后,切片石蜡块(德国徕卡RM 2265)执行以下deparaffinization与苏木精和伊红染色。Three-micrometer组织光学显微镜幻灯片是透过徕卡数码相机DMC5400(德国)。

 2.12。统计分析

获得统计数据处理进行了使用SPSS(16.0版)( 10]。(M)连续变量被当作平均值±平方偏差(SD)。常态分布是由单向方差分析(方差分析)。Newman-Keuls参数准则用于组间比较。LD50指标计算概率元分析( 6]。

 3所示。结果与讨论 3.1。结果

急性毒性IV管理制定的老鼠是205±7毫克/公斤和LDOne hundred.其活性物质平均指数108±12毫克/公斤( P = 0.003 ,图 1)。LD50指标的制定及其活性成分LHT-4-00 SC路线的更高(657±21个毫克/公斤和297±20毫克/公斤LHT-15-32 LHT-4-00,分别)比静脉给药途径。

急性毒性LHT-15-32及其活性物质对小鼠: ∗ P < 0.05 与LHT-4-00相比(方差分析)。

眼眶下的注射利多卡因导致温和牙科麻醉与牙周炎大鼠发病持续长不超过17.3±2.3分钟(图 2)。LHT-4-00深麻醉麻醉开始的牙速度较低。止痛的的时间平均为32.4±3.4分钟( P = 0.001 与利多卡因相比)。制定诱导全麻醉开始32.1±1.7分钟后眼眶下的注入。主要组的老鼠没有反应在痛苦的激励72.1±2.6分钟的刺激( P = 0.001 利多卡因和LHT-4-00相比)。

上摩尔疼痛敏感性动态与牙周炎大鼠2% LHT-15-32或参照药物后眼眶下的注入。

阻塞性睡眠呼吸暂停综合症和牙周炎牙龈粘膜的老鼠增加超过三次与完整的动物相比(表 1),而TAC比例下降。所有测试解决方案一天后眼眶下的政府地方氧化应激活动的变化引起的。阻塞性睡眠呼吸暂停综合症在老鼠的牙龈组织收到了利多卡因下降到6.4±0.7×103小鬼/ s, LHT-4-00 5.3±0.4×103小鬼/ s, LHT-15-32 3.2±0.3×103小鬼/ s ( P = 0.03 与利多卡因相比)。TAC利多卡因组中值为1.7±0.4×103小鬼/ s, LHT-4-00组3.9±0.3×103小鬼/ s,在主组为4.7±0.5×103小鬼/ s ( P = 0.005 与利多卡因相比)。牙周炎与il - 1 β和TNF-α高程以及组织il - 10水平的抑郁。与利多卡因组,在主组il - 1 β和TNF-α组织水平显著下降而il - 10浓度保持不变(表 1)。

局部氧化应激活动和组织il - 1 β、il - 10和TNF-α浓度与牙周炎牙龈粘膜的老鼠一天后LHT-15-32眼眶下的应用程序。

动物群体 化学发光,×103小鬼/秒 细胞因子水平,首选/ g
阻塞性睡眠呼吸暂停综合症 TAC il - 1 β il - 10 TNF-α
完整的集团, n= 10 2.8±0.2 3.1±0.3 0.3±0.1 15.8±0.5 12.4±1.8
控制, n= 10 8.3±0.4 ∗ 1.0±0.2 ∗ 3.2±0.4 ∗ 3.6±0.3 ∗ 129.3±4.9 ∗
2%利多卡因, n= 10 6.4±0.7 ∗ 1.7±0.4 3.0±0.2 ∗ 4.7±0.4 ∗ 110.6±3.5 ∗
LHT-4-00 2%, n= 10 5.4±0.4 ∗ # 3.9±0.3†# 2.7±0.3 ∗ 3.9±0.3 ∗ 103.9±4.1 # ∗
LHT-15-32 2%, n= 10 3.2±0.3†# 4.7±0.5†# 0.9±0.1 ∗ †# 4.3±0.5 ∗ 23.7±2.3†# ∗

注意: P < 0.05 ; ∗ 相比与完整的组;#相比与控制;__相比与利多卡因组(方差分析;Newman-Keuls标准)。

坐骨神经标本美联社与衰减振幅回答灌注与LHT-15-32-containing解决下生理和温和的酸中毒条件(图 3)。LHT-15-32 10点−6到10−3M集中应用在外侧神经膜的剂量依赖性的方式阻止钠通道的孤立的神经元(图 4),计算电子商务507.78×10−5M。

LHT-15-32抑制Na+当前(INa)通过膜分离 Limnaea stagnalis神经元灌注formulation-containing解决方案(1)10−3;2、10−4;3、10−5;4、10−6); n在每个实验= 6。

美联社Concentration-related萧条振幅的基线(%) Rana radibunda灌注的坐骨神经LHT-15-32 pH值在6.5(1)及7.4 (2), n在每个实验= 6。

牙龈组织的形态学评价动物的完整的牙齿没有变化:粘膜正常鳞状上皮覆盖。黏膜下层结缔组织纤维组成,成纤维细胞,毛细血管的器皿有限数量的淋巴细胞。牙周韧带是保存(数据 5(一个)和 5 (b))。实验性牙周炎体现了嗜中性粒细胞浸润和牙周组织裂解(数字 5 (c)和 5 (d))。眼眶下的政府LHT-15-32触发软组织修复的影响上摩尔老鼠的主要集团(数字 5 (e)和 5 (f))。我们注意到,这是鳞状上皮粘膜覆盖着。黏膜下层和牙周韧带包含成熟的肉芽组织有大量成纤维细胞的细胞,淋巴细胞,巨噬细胞和毛细血管类型的船舶。

局部软组织形态变化的完整的老鼠(A和B),动物对照组(C和D)和大鼠的主要组(E和F)五天后LA评估。苏木精和伊红染色法。(一)完整的老鼠,×5。(b)完整的老鼠,×200。(c)对照组的老鼠,×5。(d)对照组的老鼠,×200。(e)大鼠的主要群体,×5。(f)大鼠的主要群体,×200。

 3.2。讨论

许多实践者已经经历的失败行动在牙周炎患者麻醉的牙齿。增加操作期间不适甚至可以导致不良临床结果和令人不满意的结果 11]。提出了几个原因来解释缺乏LA效应在牙科实践与炎症过程。其中,(一)对周围血管系统的影响;(2)损害痛觉受器由于局部氧化应激激活;和(3)减少的敏感性生物洛杉矶最大的目标的重要性( 1]。小说LHT-15-32制定了解决其中的一些,因此加强疼痛控制牙科实践的有效性和安全性。

制定包含N-acetyl-L-glutamic盐二甲基乙酰胺(利多卡因)(LHT-4-00),通过改进药理属性(如拉功效的深度和持续时间),作为一种活性成分( 12]。研究结果表明长时间拉的影响制定与牙周炎动物相比不仅与利多卡因LHT-4-00: LHT-15-32诱发全麻醉开始32.1±1.7分钟眼眶下的注射后不少于72.1±2.6分钟的持续时间。作为 在体外实验表明,LHT-15-32抑制了孤立的神经传导(10多种浓度−6-10年−3米)应用于神经膜块的外端Na渠道剂量依赖性的方式。然而,令人满意的疼痛控制在这种情况下只有Na无法解释+通道阻塞和神经传导抑郁,因为参考毒品法案同样( 13]。

似是而非的解释可能与抗氧化和vasoconstrictive组件相关的配方。等人已经证明了土屋细胞膜氧化应激之间的直接相关性和LA活动( 1]。LHT-15-32更有效地平衡阻塞性睡眠呼吸暂停综合症和TAC在老鼠的牙龈组织比其活性成分作为单一疗法。值得注意的是减少当地牙周和牙龈炎症过程可能与LA改进如药物安全直接相关( 14]。达等人表明il - 1的至关重要的作用 β在炎症反应和TNF-α痛觉过敏发展( 13),而张等人报道充分参与的il - 10在牙周炎患者牙槽骨修复 15]。降低il - 1 β和TNF-α水平一天LHT-15-32注射后显示了药物在细胞因子参与调节,因此批准药物的抗炎特性。急性毒性数据结合本地网站的形态变化行动可能为研究人员提供有价值的信息关于药品安全。急性毒性的LHT-15-32明显比其低活性物质LHT-4-00通过血管内和皮下给药途径。同时,形态学检查受影响的牙齿周围软组织显示的特性引发修复动物群体中接受LHT-15-32-induced五天前。

然而,该配方并非没有限制。组织和LA药物溶液pH值是一个临界点,LHT-15-32的重要性。因此,为了实现有效的疼痛控制,pH值的制定应该调整 前临时,这与一些不便。

总的来说,该配方可能被认为是一个有效且安全的麻醉的牙齿炎症变化的工具。

 4所示。结论

小说配方LHT-15-32毒性低于其活性物质和利多卡因,诱发深和长眼眶下的麻醉大鼠的上部与牙周炎摩尔,抑制氧化应激反应和炎症过程在牙龈组织,并抑制孤立神经传导性温和条件下由于Na酸中毒+当前的阻塞。因此,制定可能被认为是一种有效和安全的方法在牙周炎牙麻醉。

 数据可用性

抽象的发明LHT-4-00物质用于支持这项研究的结果已经存入俄罗斯联邦知识产权服务存储库( http://www1.fips.ru/ofpstorage/doc/izpm/runwc1/000/000/002/657/613/ИЗ00001/document.pdf——02657613)。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

 确认

这项工作在一定程度上支持的俄罗斯政府研究理事会资助(批准号2017 - 14 - n08 - 0036)。作者非常感谢同事的评论手稿和专门的实验室工作人员协助。

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